泸州医学院学报
瀘州醫學院學報
로주의학원학보
JOURNAL OF LUZHOU MEDICAL COLLEGE
2011年
5期
521-525
,共5页
曾永秋%赵矫%刘岚%陈绍坤%余红%税青林
曾永鞦%趙矯%劉嵐%陳紹坤%餘紅%稅青林
증영추%조교%류람%진소곤%여홍%세청림
DF3启动子%hTERT基因%RNA干扰%肿瘤特异性
DF3啟動子%hTERT基因%RNA榦擾%腫瘤特異性
DF3계동자%hTERT기인%RNA간우%종류특이성
目的:构建带有肿瘤特异性DF3启动子、针对hTERT基因的RNA干扰表达载体pGenesil- 10-miR30-DF3-hTERT,探讨该表达载体的肿瘤靶向性基因抑制作用.方法:分别用针对hTERT基因的RNA干扰寡核苷酸序列及DF3启动子取代质粒pGenesil-10-Micro30中原有的miR30序列及CMV启动子,构建pGenesil- 10-miR30-DF3-hTERT载体并进行酶切及测序鉴定.将该载体分别转染人乳腺癌MCF-7细胞、肝癌HepG2细胞及造血干细胞,ELISA法检测hTERT蛋白的表达情况.结果:重组质粒经酶切及测序鉴定证实符合设计要求,构建成功.ELISA法检测结果显示,实验组MCF-7细胞及HepG2细胞的hTERT蛋白下降显著(P＜0.05),其中以MCF-7细胞下降更为明显；造血干细胞实验组则无明显变化(P＞0.05).结论:DF3启动子调控的hTERT基因的RNA干扰表达载体能有效抑制DF3阳性肿瘤细胞中hTERT的表达,以乳腺癌细胞效果最为显著,而对端粒酶阳性的正常细胞不产生影响.
目的:構建帶有腫瘤特異性DF3啟動子、針對hTERT基因的RNA榦擾錶達載體pGenesil- 10-miR30-DF3-hTERT,探討該錶達載體的腫瘤靶嚮性基因抑製作用.方法:分彆用針對hTERT基因的RNA榦擾寡覈苷痠序列及DF3啟動子取代質粒pGenesil-10-Micro30中原有的miR30序列及CMV啟動子,構建pGenesil- 10-miR30-DF3-hTERT載體併進行酶切及測序鑒定.將該載體分彆轉染人乳腺癌MCF-7細胞、肝癌HepG2細胞及造血榦細胞,ELISA法檢測hTERT蛋白的錶達情況.結果:重組質粒經酶切及測序鑒定證實符閤設計要求,構建成功.ELISA法檢測結果顯示,實驗組MCF-7細胞及HepG2細胞的hTERT蛋白下降顯著(P＜0.05),其中以MCF-7細胞下降更為明顯；造血榦細胞實驗組則無明顯變化(P＞0.05).結論:DF3啟動子調控的hTERT基因的RNA榦擾錶達載體能有效抑製DF3暘性腫瘤細胞中hTERT的錶達,以乳腺癌細胞效果最為顯著,而對耑粒酶暘性的正常細胞不產生影響.
목적:구건대유종류특이성DF3계동자、침대hTERT기인적RNA간우표체재체pGenesil- 10-miR30-DF3-hTERT,탐토해표체재체적종류파향성기인억제작용.방법:분별용침대hTERT기인적RNA간우과핵감산서렬급DF3계동자취대질립pGenesil-10-Micro30중원유적miR30서렬급CMV계동자,구건pGenesil- 10-miR30-DF3-hTERT재체병진행매절급측서감정.장해재체분별전염인유선암MCF-7세포、간암HepG2세포급조혈간세포,ELISA법검측hTERT단백적표체정황.결과:중조질립경매절급측서감정증실부합설계요구,구건성공.ELISA법검측결과현시,실험조MCF-7세포급HepG2세포적hTERT단백하강현저(P＜0.05),기중이MCF-7세포하강경위명현；조혈간세포실험조칙무명현변화(P＞0.05).결론:DF3계동자조공적hTERT기인적RNA간우표체재체능유효억제DF3양성종류세포중hTERT적표체,이유선암세포효과최위현저,이대단립매양성적정상세포불산생영향.
