江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2011年
4期
878-882
,共5页
孙军涛%王洪新%吕文平%马朝阳%娄在祥%戴易兴
孫軍濤%王洪新%呂文平%馬朝暘%婁在祥%戴易興
손군도%왕홍신%려문평%마조양%루재상%대역흥
β-1,3-1,4-葡聚糖酶%克隆%表达%纯化%酶学特性
β-1,3-1,4-葡聚糖酶%剋隆%錶達%純化%酶學特性
β-1,3-1,4-포취당매%극륭%표체%순화%매학특성
为了获得耐热的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,利用PCR技术从解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)中扩增β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bgl),构建重组表达质粒pET30a-bgl转化至大肠杆菌BL21( DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷酸(IPTG)诱导表达获得重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶,并对纯化后的β-1,3-1,4-葡聚糖酶进行酶学特性研究.结果表明,摇瓶培养的重组基因工程菌的酶活力为80 U/ml,纯化后酶的比活力为4 969 U/mg,是纯化前的54.6倍；酶的分子量为2.6×104左右,最适温度为50℃,最适pH为6.0,在pH 5.0和pH 8.0之间有很好的稳定性,90℃下酶的半衰期(t1/2)为21 min；该酶对燕麦葡聚糖和地衣多糖有很好的专一性.重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶有较好的耐酸、耐热性,在酿造和饲料加工过程中能够保持较高的活性,具有很好的工业应用价值.
為瞭穫得耐熱的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,利用PCR技術從解澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)中擴增β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因(bgl),構建重組錶達質粒pET30a-bgl轉化至大腸桿菌BL21( DE3),經異丙基硫代-β-D-半乳糖苷痠(IPTG)誘導錶達穫得重組β-1,3-1,4-葡聚糖酶,併對純化後的β-1,3-1,4-葡聚糖酶進行酶學特性研究.結果錶明,搖瓶培養的重組基因工程菌的酶活力為80 U/ml,純化後酶的比活力為4 969 U/mg,是純化前的54.6倍；酶的分子量為2.6×104左右,最適溫度為50℃,最適pH為6.0,在pH 5.0和pH 8.0之間有很好的穩定性,90℃下酶的半衰期(t1/2)為21 min；該酶對燕麥葡聚糖和地衣多糖有很好的專一性.重組β-1,3-1,4-葡聚糖酶有較好的耐痠、耐熱性,在釀造和飼料加工過程中能夠保持較高的活性,具有很好的工業應用價值.
위료획득내열적β-1,3-1,4-포취당매,이용PCR기술종해정분아포간균(Bacillus amyloliquefaciens)중확증β-1,3-1,4-포취당매기인(bgl),구건중조표체질립pET30a-bgl전화지대장간균BL21( DE3),경이병기류대-β-D-반유당감산(IPTG)유도표체획득중조β-1,3-1,4-포취당매,병대순화후적β-1,3-1,4-포취당매진행매학특성연구.결과표명,요병배양적중조기인공정균적매활력위80 U/ml,순화후매적비활력위4 969 U/mg,시순화전적54.6배；매적분자량위2.6×104좌우,최괄온도위50℃,최괄pH위6.0,재pH 5.0화pH 8.0지간유흔호적은정성,90℃하매적반쇠기(t1/2)위21 min；해매대연맥포취당화지의다당유흔호적전일성.중조β-1,3-1,4-포취당매유교호적내산、내열성,재양조화사료가공과정중능구보지교고적활성,구유흔호적공업응용개치.
