生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2001年
5期
732-735
,共4页
Cre%loxP%位点专一性重组%基因切除%伤寒杆菌
Cre%loxP%位點專一性重組%基因切除%傷寒桿菌
Cre%loxP%위점전일성중조%기인절제%상한간균
来源于P1噬菌体的位点专一性重组系统loxP/Cre,已成为一种新的DNA操作的有用工具,在体内外都获得了成功的应用.为了将四环素诱导表达系统引入减毒伤寒杆菌CVD908株中,tetR-loxP-neo串联基因已通过同源重组被定位插入在CVD908株的△aroC位点中.构建一Cre酶表达受启动子PLteo-1控制的自杀质粒pJG9/Cre,以切除CVD908株/△aroC中同向loxP序列之间的neo基因.质粒pJG9/Cre电转化入菌中,加入去水四环素诱导Cre酶表达,通过重组切除nieo基因,再通过自杀质粒上SacB基因的启动,使质粒清除出菌细胞.抗生素鉴定和PCR扩增都证明,CVD908株△aroC位点中的neo基因被成功切除.
來源于P1噬菌體的位點專一性重組繫統loxP/Cre,已成為一種新的DNA操作的有用工具,在體內外都穫得瞭成功的應用.為瞭將四環素誘導錶達繫統引入減毒傷寒桿菌CVD908株中,tetR-loxP-neo串聯基因已通過同源重組被定位插入在CVD908株的△aroC位點中.構建一Cre酶錶達受啟動子PLteo-1控製的自殺質粒pJG9/Cre,以切除CVD908株/△aroC中同嚮loxP序列之間的neo基因.質粒pJG9/Cre電轉化入菌中,加入去水四環素誘導Cre酶錶達,通過重組切除nieo基因,再通過自殺質粒上SacB基因的啟動,使質粒清除齣菌細胞.抗生素鑒定和PCR擴增都證明,CVD908株△aroC位點中的neo基因被成功切除.
래원우P1서균체적위점전일성중조계통loxP/Cre,이성위일충신적DNA조작적유용공구,재체내외도획득료성공적응용.위료장사배소유도표체계통인입감독상한간균CVD908주중,tetR-loxP-neo천련기인이통과동원중조피정위삽입재CVD908주적△aroC위점중.구건일Cre매표체수계동자PLteo-1공제적자살질립pJG9/Cre,이절제CVD908주/△aroC중동향loxP서렬지간적neo기인.질립pJG9/Cre전전화입균중,가입거수사배소유도Cre매표체,통과중조절제nieo기인,재통과자살질립상SacB기인적계동,사질립청제출균세포.항생소감정화PCR확증도증명,CVD908주△aroC위점중적neo기인피성공절제.
