中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2005年
6期
761-766
,共6页
林蓓%藤齐真木子%岩森正男
林蓓%籐齊真木子%巖森正男
림배%등제진목자%암삼정남
小鼠%α1%2-岩藻糖转移酶%基因%糖脂%底物特异性
小鼠%α1%2-巖藻糖轉移酶%基因%糖脂%底物特異性
소서%α1%2-암조당전이매%기인%당지%저물특이성
目的对比小鼠3种GDP岩藻糖:β半乳糖苷α1,2-岩藻糖转移酶(α1,2-FT)的底物特异性.方法利用RT-PCR方法克隆小鼠3种α1,2-FT基因编码区MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ,测序后分别将其插入表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,构建表达载体pcDNA3.1-MFUT-Ⅰ、pcDNA3.1-MFUT-Ⅱ及pcDNA3.1-MFUT-Ⅲ;采用磷酸钙法将其转染于COS-7细胞进行表达,通过检测3种酶对不同种底物特性比较酶的特异性.结果小鼠基因MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ分别与人类H基因(77%)、Se基因(79%)和Sec1基因(75%)具有序列同源性.MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅱ基因转染后的COS-7细胞均具有α1,2-FT活性,而MFUT-Ⅲ基因转染的COS-7细胞无此活性.MFUT-Ⅱ同时对底物缺乏唾液酸的神经节苷脂(GA1)及单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)存在活性,分别生成产物岩藻糖基化GA1(FGA1)及岩藻糖基化神经节苷脂GM1(FGM1);而MFUT-Ⅰ仅对底物GA1存在活性.MFUT-Ⅱ对GA1的比活性约为MFUT-Ⅰ的80～90倍.MFUT-Ⅱ对GA1的比活性为GM1的10～20倍.MFUT-Ⅱ不仅具有合成Ⅳ型H抗原FGA1及FGM1活性,同时具有对乳丁糖神经酰胺(Lc4Cer)及异乳丁糖神经酰胺(nLc4Cer)的活性,可合成Ⅰ型及Ⅱ型H抗原.结论MFUT-Ⅱ是小鼠的主要α1,2-FT,具有合成Ⅳ型H抗原FGA1及FGM1的功能;MFUT-Ⅰ仅有合成Ⅳ型H抗原FGA1的功能;MFUT-Ⅲ无α1,2-FT活性.
目的對比小鼠3種GDP巖藻糖:β半乳糖苷α1,2-巖藻糖轉移酶(α1,2-FT)的底物特異性.方法利用RT-PCR方法剋隆小鼠3種α1,2-FT基因編碼區MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ,測序後分彆將其插入錶達載體pcDNA3.1的多剋隆位點,構建錶達載體pcDNA3.1-MFUT-Ⅰ、pcDNA3.1-MFUT-Ⅱ及pcDNA3.1-MFUT-Ⅲ;採用燐痠鈣法將其轉染于COS-7細胞進行錶達,通過檢測3種酶對不同種底物特性比較酶的特異性.結果小鼠基因MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ分彆與人類H基因(77%)、Se基因(79%)和Sec1基因(75%)具有序列同源性.MFUT-Ⅰ和MFUT-Ⅱ基因轉染後的COS-7細胞均具有α1,2-FT活性,而MFUT-Ⅲ基因轉染的COS-7細胞無此活性.MFUT-Ⅱ同時對底物缺乏唾液痠的神經節苷脂(GA1)及單唾液痠四己糖神經節苷脂(GM1)存在活性,分彆生成產物巖藻糖基化GA1(FGA1)及巖藻糖基化神經節苷脂GM1(FGM1);而MFUT-Ⅰ僅對底物GA1存在活性.MFUT-Ⅱ對GA1的比活性約為MFUT-Ⅰ的80～90倍.MFUT-Ⅱ對GA1的比活性為GM1的10～20倍.MFUT-Ⅱ不僅具有閤成Ⅳ型H抗原FGA1及FGM1活性,同時具有對乳丁糖神經酰胺(Lc4Cer)及異乳丁糖神經酰胺(nLc4Cer)的活性,可閤成Ⅰ型及Ⅱ型H抗原.結論MFUT-Ⅱ是小鼠的主要α1,2-FT,具有閤成Ⅳ型H抗原FGA1及FGM1的功能;MFUT-Ⅰ僅有閤成Ⅳ型H抗原FGA1的功能;MFUT-Ⅲ無α1,2-FT活性.
목적대비소서3충GDP암조당:β반유당감α1,2-암조당전이매(α1,2-FT)적저물특이성.방법이용RT-PCR방법극륭소서3충α1,2-FT기인편마구MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ,측서후분별장기삽입표체재체pcDNA3.1적다극륭위점,구건표체재체pcDNA3.1-MFUT-Ⅰ、pcDNA3.1-MFUT-Ⅱ급pcDNA3.1-MFUT-Ⅲ;채용린산개법장기전염우COS-7세포진행표체,통과검측3충매대불동충저물특성비교매적특이성.결과소서기인MFUT-Ⅰ、MFUT-Ⅱ、MFUT-Ⅲ분별여인류H기인(77%)、Se기인(79%)화Sec1기인(75%)구유서렬동원성.MFUT-Ⅰ화MFUT-Ⅱ기인전염후적COS-7세포균구유α1,2-FT활성,이MFUT-Ⅲ기인전염적COS-7세포무차활성.MFUT-Ⅱ동시대저물결핍타액산적신경절감지(GA1)급단타액산사기당신경절감지(GM1)존재활성,분별생성산물암조당기화GA1(FGA1)급암조당기화신경절감지GM1(FGM1);이MFUT-Ⅰ부대저물GA1존재활성.MFUT-Ⅱ대GA1적비활성약위MFUT-Ⅰ적80～90배.MFUT-Ⅱ대GA1적비활성위GM1적10～20배.MFUT-Ⅱ불부구유합성Ⅳ형H항원FGA1급FGM1활성,동시구유대유정당신경선알(Lc4Cer)급이유정당신경선알(nLc4Cer)적활성,가합성Ⅰ형급Ⅱ형H항원.결론MFUT-Ⅱ시소서적주요α1,2-FT,구유합성Ⅳ형H항원FGA1급FGM1적공능;MFUT-Ⅰ부유합성Ⅳ형H항원FGA1적공능;MFUT-Ⅲ무α1,2-FT활성.
