科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2006年
20期
3268-3271,3275
,共5页
黄勇%张晓楠%王丽%宋庆贺%王涛%陈南春%陈苏民
黃勇%張曉楠%王麗%宋慶賀%王濤%陳南春%陳囌民
황용%장효남%왕려%송경하%왕도%진남춘%진소민
原核基因%报道分子系统%lacZ
原覈基因%報道分子繫統%lacZ
원핵기인%보도분자계통%lacZ
构建可以鉴定原核基因启动子和检测基因转录活性的报道分子系统pPLacZ.用PCR方法从野生型大肠杆菌基因组DNA中扩增lacZ基因的全基因序列(3 258 bp)和结构基因序列(3 089 bp)克隆入经改建的含有pUC19的多克隆位点的pBR322载体中,经酶切和测序鉴定正确的两个质粒分别命名为pPLacZ-Control和pPLacZ-Basic.用PCR从野生型大肠杆菌基因组DNA中增热休克基因htpX的启动子序列并克隆入pPLacZ-Basic中,经酶切测序鉴定正确的报道载体pPLacZ-htpX转入细菌中,检测高温应激时β-半乳糖苷酶活性水平.成功构建了原核生物报道分子系统pPLacZ以及检测基因htpX的报道质粒pPLacZ-htpX.应用此系统通过检测LacZ的比活性成功测定了大肠杆菌htpX基因高温应激时其转录活性的动态变化.原核生物质粒报道分子系统pPLacZ操作简便,可替代国际通用的原核噬菌体报道分子系统对原核基因的启动子进行鉴定和转录活性检测.
構建可以鑒定原覈基因啟動子和檢測基因轉錄活性的報道分子繫統pPLacZ.用PCR方法從野生型大腸桿菌基因組DNA中擴增lacZ基因的全基因序列(3 258 bp)和結構基因序列(3 089 bp)剋隆入經改建的含有pUC19的多剋隆位點的pBR322載體中,經酶切和測序鑒定正確的兩箇質粒分彆命名為pPLacZ-Control和pPLacZ-Basic.用PCR從野生型大腸桿菌基因組DNA中增熱休剋基因htpX的啟動子序列併剋隆入pPLacZ-Basic中,經酶切測序鑒定正確的報道載體pPLacZ-htpX轉入細菌中,檢測高溫應激時β-半乳糖苷酶活性水平.成功構建瞭原覈生物報道分子繫統pPLacZ以及檢測基因htpX的報道質粒pPLacZ-htpX.應用此繫統通過檢測LacZ的比活性成功測定瞭大腸桿菌htpX基因高溫應激時其轉錄活性的動態變化.原覈生物質粒報道分子繫統pPLacZ操作簡便,可替代國際通用的原覈噬菌體報道分子繫統對原覈基因的啟動子進行鑒定和轉錄活性檢測.
구건가이감정원핵기인계동자화검측기인전록활성적보도분자계통pPLacZ.용PCR방법종야생형대장간균기인조DNA중확증lacZ기인적전기인서렬(3 258 bp)화결구기인서렬(3 089 bp)극륭입경개건적함유pUC19적다극륭위점적pBR322재체중,경매절화측서감정정학적량개질립분별명명위pPLacZ-Control화pPLacZ-Basic.용PCR종야생형대장간균기인조DNA중증열휴극기인htpX적계동자서렬병극륭입pPLacZ-Basic중,경매절측서감정정학적보도재체pPLacZ-htpX전입세균중,검측고온응격시β-반유당감매활성수평.성공구건료원핵생물보도분자계통pPLacZ이급검측기인htpX적보도질립pPLacZ-htpX.응용차계통통과검측LacZ적비활성성공측정료대장간균htpX기인고온응격시기전록활성적동태변화.원핵생물질립보도분자계통pPLacZ조작간편,가체대국제통용적원핵서균체보도분자계통대원핵기인적계동자진행감정화전록활성검측.
