微生物与感染
微生物與感染
미생물여감염
JOURNAL OF MICROBES AND INFECTION
2007年
1期
34-38
,共5页
杨捷琳%窦同海%顾鸣%吴仲梁
楊捷琳%竇同海%顧鳴%吳仲樑
양첩림%두동해%고명%오중량
空肠弯曲菌%活的不可培养状态%细胞检测%肠毒素
空腸彎麯菌%活的不可培養狀態%細胞檢測%腸毒素
공장만곡균%활적불가배양상태%세포검측%장독소
目的 通过诱导空肠弯曲菌进入活的不可培养(VBNC)状态建立细胞学模型,用VeroE6细胞和HeLa细胞检测空肠弯曲菌产细胞膨胀性肠毒素(cytotoxic distending toxin,CDT)能力的改变,并在RNA水平上进一步验证毒素的表达.方法 采用4℃冷藏及-70℃冷冻的方法诱导空肠弯曲茵进入VBNC状态,利用细胞总数计算、活细胞染色计数及可培养细胞计数间接确证VBNC状态细菌的存在,细胞对于VBNC状态下的细菌仍然敏感,并用反转录.聚合酶链反应(RT-PCR)证实空肠弯曲菌毒素基因的表达.结果 3种不同状态的细胞计数结果表明存活细胞进入了VBNC状态,细菌经4℃冷藏及-70℃冷冻后数量减少约1个数量级,在冷冻前,细菌对细胞毒性较强,72h时70%以上细胞凋亡,冷冻后的VBNC状态细菌对VeroE6和HeLa细胞的生长仍有影响,72h时约有40%细胞进入凋亡状态.结论 低温、贫养条件下空肠弯曲菌可进入VBNC状态,用常规传统的羊血平板培养基仅能使不到10%的空肠弯曲菌复苏生长,从而可以检测,在VBNC状态时,空肠弯曲菌产毒素能力改变较大,远远低于正常状态,但仍具备产毒素的能力,也从RNA水平实验得到证实.
目的 通過誘導空腸彎麯菌進入活的不可培養(VBNC)狀態建立細胞學模型,用VeroE6細胞和HeLa細胞檢測空腸彎麯菌產細胞膨脹性腸毒素(cytotoxic distending toxin,CDT)能力的改變,併在RNA水平上進一步驗證毒素的錶達.方法 採用4℃冷藏及-70℃冷凍的方法誘導空腸彎麯茵進入VBNC狀態,利用細胞總數計算、活細胞染色計數及可培養細胞計數間接確證VBNC狀態細菌的存在,細胞對于VBNC狀態下的細菌仍然敏感,併用反轉錄.聚閤酶鏈反應(RT-PCR)證實空腸彎麯菌毒素基因的錶達.結果 3種不同狀態的細胞計數結果錶明存活細胞進入瞭VBNC狀態,細菌經4℃冷藏及-70℃冷凍後數量減少約1箇數量級,在冷凍前,細菌對細胞毒性較彊,72h時70%以上細胞凋亡,冷凍後的VBNC狀態細菌對VeroE6和HeLa細胞的生長仍有影響,72h時約有40%細胞進入凋亡狀態.結論 低溫、貧養條件下空腸彎麯菌可進入VBNC狀態,用常規傳統的羊血平闆培養基僅能使不到10%的空腸彎麯菌複囌生長,從而可以檢測,在VBNC狀態時,空腸彎麯菌產毒素能力改變較大,遠遠低于正常狀態,但仍具備產毒素的能力,也從RNA水平實驗得到證實.
목적 통과유도공장만곡균진입활적불가배양(VBNC)상태건립세포학모형,용VeroE6세포화HeLa세포검측공장만곡균산세포팽창성장독소(cytotoxic distending toxin,CDT)능력적개변,병재RNA수평상진일보험증독소적표체.방법 채용4℃랭장급-70℃냉동적방법유도공장만곡인진입VBNC상태,이용세포총수계산、활세포염색계수급가배양세포계수간접학증VBNC상태세균적존재,세포대우VBNC상태하적세균잉연민감,병용반전록.취합매련반응(RT-PCR)증실공장만곡균독소기인적표체.결과 3충불동상태적세포계수결과표명존활세포진입료VBNC상태,세균경4℃랭장급-70℃냉동후수량감소약1개수량급,재냉동전,세균대세포독성교강,72h시70%이상세포조망,냉동후적VBNC상태세균대VeroE6화HeLa세포적생장잉유영향,72h시약유40%세포진입조망상태.결론 저온、빈양조건하공장만곡균가진입VBNC상태,용상규전통적양혈평판배양기부능사불도10%적공장만곡균복소생장,종이가이검측,재VBNC상태시,공장만곡균산독소능력개변교대,원원저우정상상태,단잉구비산독소적능력,야종RNA수평실험득도증실.
