CAJ | 학술논문

目的:构建针对B细胞淋巴瘤Daudi细胞系噬菌体抗体库,从中筛选特异性抗体,并对所筛选出的阳性克隆进行鉴定.方法:以Daudi细胞免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗血清滴度后,分离抗体阳性的小鼠脾淋巴细胞,提取RNA.利用RT-PCR扩增抗体к轻链和重链Fd片段,经Sac Ⅰ/Xba Ⅰ和Xho Ⅰ/Spe Ⅰ双酶切,依次克降入噬菌体载体pComb3H-SS的相应酶切位点,并电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建B细胞淋巴瘤Daudi细胞系特异性Fab噬菌体抗体库.以Daudi细胞为抗原对抗体库进行6轮"吸附-洗脱-扩增"筛选,并通过ELISA法对随机挑选的克降进行抗原结合活性测定,获得的阳性克隆进一步做DNA序列测定、在大肠杆菌XL1-Blue中进行可溶性表达,并用Western blot对表达产物的特异性作了鉴定.结果:构建了容量为3.13 × 107的抗人B细胞淋巴瘤Daudi细胞系的Fab噬菌体抗体库,并筛选获得了与Daudi细胞系特异性识别结合的4株阳性克隆.氨基酸序列分析结果显示:阳性克隆的重链、轻链可变区序列分别与基因库中已注册的鼠源性免疫球蛋白重链、轻链可变区序列有80%～94%和88%～95%同源性.阳性克隆成功在大肠杆菌细胞中可溶性表达,Western blot结果表明所获得的可溶性表达产物可与Daudi细胞膜抗原特异性结合.结论:成功地构建Fab噬菌体抗体库并筛选出针对Daudi细胞系膜抗原的抗体,为进一步研究B细胞淋巴瘤的免疫治疗提供了实验基础.
목적:구건침대B세포림파류Daudi세포계서균체항체고,종중사선특이성항체,병대소사선출적양성극륭진행감정.방법:이Daudi세포면역BALB/c소서,ELISA검측항혈청적도후,분리항체양성적소서비림파세포,제취RNA.이용RT-PCR확증항체к경련화중련Fd편단,경Sac Ⅰ/Xba Ⅰ화Xho Ⅰ/Spe Ⅰ쌍매절,의차극강입서균체재체pComb3H-SS적상응매절위점,병전전화대장간균XL1-Blue,이보조서균체VCSM13진행초감염,구건B세포림파류Daudi세포계특이성Fab서균체항체고.이Daudi세포위항원대항체고진행6륜"흡부-세탈-확증"사선,병통과ELISA법대수궤도선적극강진행항원결합활성측정,획득적양성극륭진일보주DNA서렬측정、재대장간균XL1-Blue중진행가용성표체,병용Western blot대표체산물적특이성작료감정.결과:구건료용량위3.13 × 107적항인B세포림파류Daudi세포계적Fab서균체항체고,병사선획득료여Daudi세포계특이성식별결합적4주양성극륭.안기산서렬분석결과현시:양성극륭적중련、경련가변구서렬분별여기인고중이주책적서원성면역구단백중련、경련가변구서렬유80%～94%화88%～95%동원성.양성극륭성공재대장간균세포중가용성표체,Western blot결과표명소획득적가용성표체산물가여Daudi세포막항원특이성결합.결론:성공지구건Fab서균체항체고병사선출침대Daudi세포계막항원적항체,위진일보연구B세포림파류적면역치료제공료실험기출.