南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2009年
5期
844-847,851
,共5页
涂露霞%方唯意%刘真%李欣%何英%谢思明%姚开泰
塗露霞%方唯意%劉真%李訢%何英%謝思明%姚開泰
도로하%방유의%류진%리흔%하영%사사명%요개태
真核翻译起始因子4G1%慢病毒%重组质粒%RNA干扰%鼻咽癌细胞
真覈翻譯起始因子4G1%慢病毒%重組質粒%RNA榦擾%鼻嚥癌細胞
진핵번역기시인자4G1%만병독%중조질립%RNA간우%비인암세포
目的 检测人真核翻译起始因子4G1(EIF4G1)基因在8株鼻咽癌细胞中的差异表达,寻找最高表达的细胞株.构建EIF4G1基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,建立稳定干扰EIF4G1表达的鼻咽癌细胞株,测定干扰效率.方法 应用荧光定量PCR检测EIF4G1 mRNA在鼻咽癌细胞株5-8F、6-10B、C666-1、CNE1、CNE2、HNE1、HONE1、SUNE1表达水平.构建重组靶向EIF4G1 shRNA慢病毒表达质粒pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA.用293FT细胞包装后产生的成熟慢病毒颗粒感染5-8F细胞.经杀稻瘟菌素筛选后,建立稳定表达siRNA的5-8F鼻咽癌细胞株.最后荧光定量PCR检测干扰效率.结果 在8个鼻咽癌细胞株中,EIF4G1显示在5-8F细胞株中表达最高.PCR和测序验证pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA重组质粒构建成功;经293FT细胞病毒包装,感染5-8F细胞后,与阴性对照组和未十扰组相比可明显抑制EIF4G1 mRNA水平EIF4G1表达.结论 成功构建TpLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA慢病毒重组质粒,建立了稳定靶向干扰EIF4G1表达的siRNA5-8F鼻咽癌细胞株.
目的 檢測人真覈翻譯起始因子4G1(EIF4G1)基因在8株鼻嚥癌細胞中的差異錶達,尋找最高錶達的細胞株.構建EIF4G1基因的小榦擾RNA(siRNA)錶達載體,建立穩定榦擾EIF4G1錶達的鼻嚥癌細胞株,測定榦擾效率.方法 應用熒光定量PCR檢測EIF4G1 mRNA在鼻嚥癌細胞株5-8F、6-10B、C666-1、CNE1、CNE2、HNE1、HONE1、SUNE1錶達水平.構建重組靶嚮EIF4G1 shRNA慢病毒錶達質粒pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA.用293FT細胞包裝後產生的成熟慢病毒顆粒感染5-8F細胞.經殺稻瘟菌素篩選後,建立穩定錶達siRNA的5-8F鼻嚥癌細胞株.最後熒光定量PCR檢測榦擾效率.結果 在8箇鼻嚥癌細胞株中,EIF4G1顯示在5-8F細胞株中錶達最高.PCR和測序驗證pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA重組質粒構建成功;經293FT細胞病毒包裝,感染5-8F細胞後,與陰性對照組和未十擾組相比可明顯抑製EIF4G1 mRNA水平EIF4G1錶達.結論 成功構建TpLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA慢病毒重組質粒,建立瞭穩定靶嚮榦擾EIF4G1錶達的siRNA5-8F鼻嚥癌細胞株.
목적 검측인진핵번역기시인자4G1(EIF4G1)기인재8주비인암세포중적차이표체,심조최고표체적세포주.구건EIF4G1기인적소간우RNA(siRNA)표체재체,건립은정간우EIF4G1표체적비인암세포주,측정간우효솔.방법 응용형광정량PCR검측EIF4G1 mRNA재비인암세포주5-8F、6-10B、C666-1、CNE1、CNE2、HNE1、HONE1、SUNE1표체수평.구건중조파향EIF4G1 shRNA만병독표체질립pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA.용293FT세포포장후산생적성숙만병독과립감염5-8F세포.경살도온균소사선후,건립은정표체siRNA적5-8F비인암세포주.최후형광정량PCR검측간우효솔.결과 재8개비인암세포주중,EIF4G1현시재5-8F세포주중표체최고.PCR화측서험증pLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA중조질립구건성공;경293FT세포병독포장,감염5-8F세포후,여음성대조조화미십우조상비가명현억제EIF4G1 mRNA수평EIF4G1표체.결론 성공구건TpLenti6/BLOCK-iT-DEST/EIF4G1shRNA만병독중조질립,건립료은정파향간우EIF4G1표체적siRNA5-8F비인암세포주.
