吉林农业大学学报
吉林農業大學學報
길임농업대학학보
JOURNAL OF JILIN AGRICUL TURAL UNIVERSITY
2009年
4期
402-406,415
,共6页
解佳森%肖业臣%秦玉侠%王会岩%张继威%李校垄
解佳森%肖業臣%秦玉俠%王會巖%張繼威%李校壟
해가삼%초업신%진옥협%왕회암%장계위%리교롱
天蚕素-蜂毒素杂合肽CM%人酸性成纤维细胞生长因子改构体aFGF28-154%融合基因
天蠶素-蜂毒素雜閤肽CM%人痠性成纖維細胞生長因子改構體aFGF28-154%融閤基因
천잠소-봉독소잡합태CM%인산성성섬유세포생장인자개구체aFGF28-154%융합기인
构建重组改构体aFGF28-154和抗菌肽CM基因的融合基因,使其在大肠杆菌系统中融合表达,以期获得具有靶向FGFR高表达肿瘤细胞的抗肿瘤融合蛋白.利用PCR引物延伸的方法拼接得到带有G4S铰链的天蚕素-蜂毒素杂合肽CM与aFGF28-154的融合基因,插入大肠杆菌表达载体pET20b中,构建表达质粒pET-CM-aFGF28-154,并转化至大肠杆菌BL21(DE3),氨苄青霉素抗性筛选重组转化子.IPTG诱导4 h后,菌液经超声破碎,以包涵体形式表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的18%.将包涵体溶解并通过差速离心除去部分杂蛋白,透析复性并用Heparin Sepharose CL-6B亲和层析,目的蛋白得到初步纯化,为进一步研究蛋白的生物学活性奠定了基础.
構建重組改構體aFGF28-154和抗菌肽CM基因的融閤基因,使其在大腸桿菌繫統中融閤錶達,以期穫得具有靶嚮FGFR高錶達腫瘤細胞的抗腫瘤融閤蛋白.利用PCR引物延伸的方法拼接得到帶有G4S鉸鏈的天蠶素-蜂毒素雜閤肽CM與aFGF28-154的融閤基因,插入大腸桿菌錶達載體pET20b中,構建錶達質粒pET-CM-aFGF28-154,併轉化至大腸桿菌BL21(DE3),氨芐青黴素抗性篩選重組轉化子.IPTG誘導4 h後,菌液經超聲破碎,以包涵體形式錶達的融閤蛋白約佔菌體總蛋白的18%.將包涵體溶解併通過差速離心除去部分雜蛋白,透析複性併用Heparin Sepharose CL-6B親和層析,目的蛋白得到初步純化,為進一步研究蛋白的生物學活性奠定瞭基礎.
구건중조개구체aFGF28-154화항균태CM기인적융합기인,사기재대장간균계통중융합표체,이기획득구유파향FGFR고표체종류세포적항종류융합단백.이용PCR인물연신적방법병접득도대유G4S교련적천잠소-봉독소잡합태CM여aFGF28-154적융합기인,삽입대장간균표체재체pET20b중,구건표체질립pET-CM-aFGF28-154,병전화지대장간균BL21(DE3),안변청매소항성사선중조전화자.IPTG유도4 h후,균액경초성파쇄,이포함체형식표체적융합단백약점균체총단백적18%.장포함체용해병통과차속리심제거부분잡단백,투석복성병용Heparin Sepharose CL-6B친화층석,목적단백득도초보순화,위진일보연구단백적생물학활성전정료기출.
