中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2009年
8期
1041-1044
,共4页
王铁东%李小平%逄大欣%欧阳红生
王鐵東%李小平%逄大訢%歐暘紅生
왕철동%리소평%방대흔%구양홍생
抗菌肽%天蚕素%乳腺%暂态表达
抗菌肽%天蠶素%乳腺%暫態錶達
항균태%천잠소%유선%잠태표체
根据已发表的天蚕素B的cDNA序列化学合成4务引物,以重叠延伸PCR的方法合成了真核细胞偏爱密码子编码的抗菌肽天蚕素B基因,将其克隆于pMD18-T栽体,DNA序列分析证实合成的抗菌肽基因的碱基序列与设计的序列完全一致.利用山羊-β酪蛋白基因5'侧翼调控序列和真核基因表达栽体plRES1-neo,构建抗菌肽天蚕素B的乳腺组织特异性表达载体pbCP-cpin,将该载体溶于生理盐水,注入处于泌乳期的成年母山羊乳腺组织进行暂时表达.通过对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌试验确定了抗菌肽天蚕素B基因在山羊乳腺中的表达和抗菌活性.本试验建立了抗菌肽天蚕素B的乳腺瞬时表达系统,为验证各调控元件以及抗菌肽基因在转基因动物乳汁中分泌表达的有效性和可行性提供了一个快速检测系统.
根據已髮錶的天蠶素B的cDNA序列化學閤成4務引物,以重疊延伸PCR的方法閤成瞭真覈細胞偏愛密碼子編碼的抗菌肽天蠶素B基因,將其剋隆于pMD18-T栽體,DNA序列分析證實閤成的抗菌肽基因的堿基序列與設計的序列完全一緻.利用山羊-β酪蛋白基因5'側翼調控序列和真覈基因錶達栽體plRES1-neo,構建抗菌肽天蠶素B的乳腺組織特異性錶達載體pbCP-cpin,將該載體溶于生理鹽水,註入處于泌乳期的成年母山羊乳腺組織進行暫時錶達.通過對大腸桿菌、金黃色葡萄毬菌的抑菌試驗確定瞭抗菌肽天蠶素B基因在山羊乳腺中的錶達和抗菌活性.本試驗建立瞭抗菌肽天蠶素B的乳腺瞬時錶達繫統,為驗證各調控元件以及抗菌肽基因在轉基因動物乳汁中分泌錶達的有效性和可行性提供瞭一箇快速檢測繫統.
근거이발표적천잠소B적cDNA서렬화학합성4무인물,이중첩연신PCR적방법합성료진핵세포편애밀마자편마적항균태천잠소B기인,장기극륭우pMD18-T재체,DNA서렬분석증실합성적항균태기인적감기서렬여설계적서렬완전일치.이용산양-β락단백기인5'측익조공서렬화진핵기인표체재체plRES1-neo,구건항균태천잠소B적유선조직특이성표체재체pbCP-cpin,장해재체용우생리염수,주입처우비유기적성년모산양유선조직진행잠시표체.통과대대장간균、금황색포도구균적억균시험학정료항균태천잠소B기인재산양유선중적표체화항균활성.본시험건립료항균태천잠소B적유선순시표체계통,위험증각조공원건이급항균태기인재전기인동물유즙중분비표체적유효성화가행성제공료일개쾌속검측계통.
