南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2010年
10期
2219-2223
,共5页
王洁%张颖骞%钟光明%余平
王潔%張穎鶱%鐘光明%餘平
왕길%장영건%종광명%여평
沙眼衣原体%Tarp%单克隆抗体
沙眼衣原體%Tarp%單剋隆抗體
사안의원체%Tarp%단극륭항체
目的 制备抗衣原体Tarp蛋白的单克隆抗体,为探讨Tarp蛋白的生物学特性及功能提供实验工具.方法 克隆表达沙眼衣原体血清型D重组Tarp融合蛋白,并以其为免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,应用间接免疫荧光法筛选阳性克隆和有限稀释克隆化,获得鼠抗沙眼衣原体血清型Dtarp蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA法鉴定单克隆抗体的抗Tarp特异性.并应用问接免疫荧光法鉴定单克隆抗体的亚类和衣原体种属特异性.结果 成功克隆表达了重组GST-Tarp融合蛋白,其相对分子质量约为136 000;成功地建立了7株稳定分泌抗Tarp蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株;7株单克隆抗体均特异性的识别Tarp蛋白而不识别其他衣原体性蛋白;2株单克隆抗体(R586.2和R8G7.2)的免疫球蛋白亚类为IgG2a,其余5株单克隆抗体(R4D5,R2HI.2,R12812,R2H7和RSG8.1)的免疫球蛋白亚类均为IgG1;7株单克隆抗体全部特异性识别衣原体血清型A、D、L2,而不识别MoPn、6BC和AR39.结论 获得了特异性识别沙眼衣原体血清型Dtarp蛋白的单克隆抗体,为Tarp蛋白的结构及生物学功能研究莫定了基础.
目的 製備抗衣原體Tarp蛋白的單剋隆抗體,為探討Tarp蛋白的生物學特性及功能提供實驗工具.方法 剋隆錶達沙眼衣原體血清型D重組Tarp融閤蛋白,併以其為免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾細胞和SP2/0骨髓瘤細胞進行常規融閤,應用間接免疫熒光法篩選暘性剋隆和有限稀釋剋隆化,穫得鼠抗沙眼衣原體血清型Dtarp蛋白單剋隆抗體的雜交瘤細胞株,ELISA法鑒定單剋隆抗體的抗Tarp特異性.併應用問接免疫熒光法鑒定單剋隆抗體的亞類和衣原體種屬特異性.結果 成功剋隆錶達瞭重組GST-Tarp融閤蛋白,其相對分子質量約為136 000;成功地建立瞭7株穩定分泌抗Tarp蛋白的單剋隆抗體雜交瘤細胞株;7株單剋隆抗體均特異性的識彆Tarp蛋白而不識彆其他衣原體性蛋白;2株單剋隆抗體(R586.2和R8G7.2)的免疫毬蛋白亞類為IgG2a,其餘5株單剋隆抗體(R4D5,R2HI.2,R12812,R2H7和RSG8.1)的免疫毬蛋白亞類均為IgG1;7株單剋隆抗體全部特異性識彆衣原體血清型A、D、L2,而不識彆MoPn、6BC和AR39.結論 穫得瞭特異性識彆沙眼衣原體血清型Dtarp蛋白的單剋隆抗體,為Tarp蛋白的結構及生物學功能研究莫定瞭基礎.
목적 제비항의원체Tarp단백적단극륭항체,위탐토Tarp단백적생물학특성급공능제공실험공구.방법 극륭표체사안의원체혈청형D중조Tarp융합단백,병이기위면역원면역Balb/c소서,취면역소서적비세포화SP2/0골수류세포진행상규융합,응용간접면역형광법사선양성극륭화유한희석극륭화,획득서항사안의원체혈청형Dtarp단백단극륭항체적잡교류세포주,ELISA법감정단극륭항체적항Tarp특이성.병응용문접면역형광법감정단극륭항체적아류화의원체충속특이성.결과 성공극륭표체료중조GST-Tarp융합단백,기상대분자질량약위136 000;성공지건립료7주은정분비항Tarp단백적단극륭항체잡교류세포주;7주단극륭항체균특이성적식별Tarp단백이불식별기타의원체성단백;2주단극륭항체(R586.2화R8G7.2)적면역구단백아류위IgG2a,기여5주단극륭항체(R4D5,R2HI.2,R12812,R2H7화RSG8.1)적면역구단백아류균위IgG1;7주단극륭항체전부특이성식별의원체혈청형A、D、L2,이불식별MoPn、6BC화AR39.결론 획득료특이성식별사안의원체혈청형Dtarp단백적단극륭항체,위Tarp단백적결구급생물학공능연구막정료기출.
