中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2011年
6期
497-501
,共5页
王宁飞%蔡富娟%刘帅%宋亮%谢业功%王玉珍
王寧飛%蔡富娟%劉帥%宋亮%謝業功%王玉珍
왕저비%채부연%류수%송량%사업공%왕옥진
多聚胞苷酸%脂多糖%一氧化氮合酶%一氧化氮
多聚胞苷痠%脂多糖%一氧化氮閤酶%一氧化氮
다취포감산%지다당%일양화담합매%일양화담
目的:通过建立稳定表达Rab7及其突变体的巨噬细胞系,分析稳定表达细胞系的生物学特性,研究Rab7及其突变体基因过表达后对LPS和Poly I:C刺激的巨噬细胞表达iNOS/NO的影响.方法:将Rab7及其突变体Rab7(T22N)的真核表达载体通过脂质体法转染RAW264.7细胞,G418选择性培养基筛选,建立稳定表达Rab7及Rab7T22N的细胞系.通过RT-PCR和Western blot方法鉴定稳定表达细胞系.通过观察细胞形态及MTT法分析稳定表达细胞系的生长特性.以LPS和Poly I:C刺激稳定表达细胞系,不同时间后检测NO和iNOS的表达量变化.结果:与转染空质粒的细胞相比,转染Rab7和Rab7T22N的细胞中Rab7的mRNA和蛋白水平都显著增高.Rab7过表达后引起细胞形态变化并显著抑制了细胞增殖,Rab7T22N过表达后促进细胞增殖.Rab7过表达后,巨噬细胞在LPS和Poly I:C刺激后分泌的iNOS 和NO显著降低,而Rab7T22N过表达后iNOS和NO的分泌又恢复.结论:成功建立了稳定表达Rab7及其突变体的细胞系.Rab7过表达后抑制了细胞增殖,抑制了Poly I:C和LPS刺激后巨噬细胞中NO和iNOS的表达.该研究为进一步阐明Rab7在TLRs信号通路中的作用奠定了基础.
目的:通過建立穩定錶達Rab7及其突變體的巨噬細胞繫,分析穩定錶達細胞繫的生物學特性,研究Rab7及其突變體基因過錶達後對LPS和Poly I:C刺激的巨噬細胞錶達iNOS/NO的影響.方法:將Rab7及其突變體Rab7(T22N)的真覈錶達載體通過脂質體法轉染RAW264.7細胞,G418選擇性培養基篩選,建立穩定錶達Rab7及Rab7T22N的細胞繫.通過RT-PCR和Western blot方法鑒定穩定錶達細胞繫.通過觀察細胞形態及MTT法分析穩定錶達細胞繫的生長特性.以LPS和Poly I:C刺激穩定錶達細胞繫,不同時間後檢測NO和iNOS的錶達量變化.結果:與轉染空質粒的細胞相比,轉染Rab7和Rab7T22N的細胞中Rab7的mRNA和蛋白水平都顯著增高.Rab7過錶達後引起細胞形態變化併顯著抑製瞭細胞增殖,Rab7T22N過錶達後促進細胞增殖.Rab7過錶達後,巨噬細胞在LPS和Poly I:C刺激後分泌的iNOS 和NO顯著降低,而Rab7T22N過錶達後iNOS和NO的分泌又恢複.結論:成功建立瞭穩定錶達Rab7及其突變體的細胞繫.Rab7過錶達後抑製瞭細胞增殖,抑製瞭Poly I:C和LPS刺激後巨噬細胞中NO和iNOS的錶達.該研究為進一步闡明Rab7在TLRs信號通路中的作用奠定瞭基礎.
목적:통과건립은정표체Rab7급기돌변체적거서세포계,분석은정표체세포계적생물학특성,연구Rab7급기돌변체기인과표체후대LPS화Poly I:C자격적거서세포표체iNOS/NO적영향.방법:장Rab7급기돌변체Rab7(T22N)적진핵표체재체통과지질체법전염RAW264.7세포,G418선택성배양기사선,건립은정표체Rab7급Rab7T22N적세포계.통과RT-PCR화Western blot방법감정은정표체세포계.통과관찰세포형태급MTT법분석은정표체세포계적생장특성.이LPS화Poly I:C자격은정표체세포계,불동시간후검측NO화iNOS적표체량변화.결과:여전염공질립적세포상비,전염Rab7화Rab7T22N적세포중Rab7적mRNA화단백수평도현저증고.Rab7과표체후인기세포형태변화병현저억제료세포증식,Rab7T22N과표체후촉진세포증식.Rab7과표체후,거서세포재LPS화Poly I:C자격후분비적iNOS 화NO현저강저,이Rab7T22N과표체후iNOS화NO적분비우회복.결론:성공건립료은정표체Rab7급기돌변체적세포계.Rab7과표체후억제료세포증식,억제료Poly I:C화LPS자격후거서세포중NO화iNOS적표체.해연구위진일보천명Rab7재TLRs신호통로중적작용전정료기출.
