解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2011年
5期
644-648
,共5页
李延兰%贾德永%付洁%刘慧娟
李延蘭%賈德永%付潔%劉慧娟
리연란%가덕영%부길%류혜연
重组人粒细胞集落刺激因子%神经干细胞%信号转导与转录激活因子3%免疫荧光%免疫印迹法%小鼠
重組人粒細胞集落刺激因子%神經榦細胞%信號轉導與轉錄激活因子3%免疫熒光%免疫印跡法%小鼠
중조인립세포집락자격인자%신경간세포%신호전도여전록격활인자3%면역형광%면역인적법%소서
目的 探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对小鼠胚胎神经干细胞(NSCs)增殖的作用.方法 分离培养小鼠NSCs,通过向培养基中添加G-CSF(10、30、60、100和200μg/L),四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法以及5-溴-2′-脱氧尿苷(BrdU) 免疫荧光染色标记检测NSCs的增殖.免疫印迹法检测NSCs增殖时信号转导与转录激活因子3(STAT3)和磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)的表达.结果 神经干细胞表达G-CSF受体,细胞活性随G-CSF的浓度不同表现出一定的剂量依赖性,当G-CSF的浓度为100μg/L时细胞的活性最高.G-CSF处理组的细胞增殖活性明显高于对照组.进一步证实,在G-CSF处理后,p-STAT3的表达则在5 min开始升高,30 min 到达峰值,之后开始下降,至75 min 接近正常水平.加入G-CSF受体的抗体后,p-STAT3的活化现象消失,并且细胞的增殖也明显低于G-CSF作用组,和对照组接近.结论 rhG-CSF可促进小鼠NSCs的增殖,其作用机制可能是通过细胞表面的G-CSF-R促进STAT3的活化.G-CSF可能作用于内源性NSCs的活化和增殖.
目的 探討重組人粒細胞集落刺激因子(rhG-CSF)對小鼠胚胎神經榦細胞(NSCs)增殖的作用.方法 分離培養小鼠NSCs,通過嚮培養基中添加G-CSF(10、30、60、100和200μg/L),四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法以及5-溴-2′-脫氧尿苷(BrdU) 免疫熒光染色標記檢測NSCs的增殖.免疫印跡法檢測NSCs增殖時信號轉導與轉錄激活因子3(STAT3)和燐痠化信號轉導和轉錄激活因子3(p-STAT3)的錶達.結果 神經榦細胞錶達G-CSF受體,細胞活性隨G-CSF的濃度不同錶現齣一定的劑量依賴性,噹G-CSF的濃度為100μg/L時細胞的活性最高.G-CSF處理組的細胞增殖活性明顯高于對照組.進一步證實,在G-CSF處理後,p-STAT3的錶達則在5 min開始升高,30 min 到達峰值,之後開始下降,至75 min 接近正常水平.加入G-CSF受體的抗體後,p-STAT3的活化現象消失,併且細胞的增殖也明顯低于G-CSF作用組,和對照組接近.結論 rhG-CSF可促進小鼠NSCs的增殖,其作用機製可能是通過細胞錶麵的G-CSF-R促進STAT3的活化.G-CSF可能作用于內源性NSCs的活化和增殖.
목적 탐토중조인립세포집락자격인자(rhG-CSF)대소서배태신경간세포(NSCs)증식적작용.방법 분리배양소서NSCs,통과향배양기중첨가G-CSF(10、30、60、100화200μg/L),사갑기우담서람(MTT)비색법이급5-추-2′-탈양뇨감(BrdU) 면역형광염색표기검측NSCs적증식.면역인적법검측NSCs증식시신호전도여전록격활인자3(STAT3)화린산화신호전도화전록격활인자3(p-STAT3)적표체.결과 신경간세포표체G-CSF수체,세포활성수G-CSF적농도불동표현출일정적제량의뢰성,당G-CSF적농도위100μg/L시세포적활성최고.G-CSF처리조적세포증식활성명현고우대조조.진일보증실,재G-CSF처리후,p-STAT3적표체칙재5 min개시승고,30 min 도체봉치,지후개시하강,지75 min 접근정상수평.가입G-CSF수체적항체후,p-STAT3적활화현상소실,병차세포적증식야명현저우G-CSF작용조,화대조조접근.결론 rhG-CSF가촉진소서NSCs적증식,기작용궤제가능시통과세포표면적G-CSF-R촉진STAT3적활화.G-CSF가능작용우내원성NSCs적활화화증식.
