中国药物与临床
中國藥物與臨床
중국약물여림상
CHINESE REMEDIES & CLINICS
2012年
6期
712-716
,共5页
卫娜%白瑞%车星星%王泽慧%肖传实%边云飞
衛娜%白瑞%車星星%王澤慧%肖傳實%邊雲飛
위나%백서%차성성%왕택혜%초전실%변운비
受体,肿瘤坏死因子,Ⅱ型%突变%遗传载体%心血管疾病
受體,腫瘤壞死因子,Ⅱ型%突變%遺傳載體%心血管疾病
수체,종류배사인자,Ⅱ형%돌변%유전재체%심혈관질병
目的 构建真核表达质粒pcDNA6.0-TNFR2196MET和pcDNA6.0-TNFR2196ARG.方法 人工合成TNFR2196MET目的 片段,与pMD18-T simple 载体连接形成克隆载体,再通过设计突变引物,PCR定点突变扩增出含有突变位点的质粒,转化到肠埃希菌感受态细胞JM109中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增.抽提质粒进行测序鉴定,得到pMD18-T simple-TNFR2196ARG.双酶切pMD18-T simple-TN-FR2196MET、pMD18-T simple-TNFR2196ARG及pcDNA6.0,将TNFR2196MET、TNFR2196ARG插入pcDNA6.0线性质粒,即构建成pcDNA6.0-TNFR2196MET和pcDNA6.0-TNFR2196ARG真核表达质粒,转化到Ecoli感受态中,筛选阳性克隆行菌液PCR和双酶切及测序鉴定.结果 酶切鉴定和测序分析验证TNFR2基因196MET和196ARG表达载体构建成功.结论 成功构建表达载体为下一步心血管疾病研究奠定了实验基础.
目的 構建真覈錶達質粒pcDNA6.0-TNFR2196MET和pcDNA6.0-TNFR2196ARG.方法 人工閤成TNFR2196MET目的 片段,與pMD18-T simple 載體連接形成剋隆載體,再通過設計突變引物,PCR定點突變擴增齣含有突變位點的質粒,轉化到腸埃希菌感受態細胞JM109中,通過氨芐青黴素抗藥性篩選齣成功轉化的暘性剋隆,併進行擴增.抽提質粒進行測序鑒定,得到pMD18-T simple-TNFR2196ARG.雙酶切pMD18-T simple-TN-FR2196MET、pMD18-T simple-TNFR2196ARG及pcDNA6.0,將TNFR2196MET、TNFR2196ARG插入pcDNA6.0線性質粒,即構建成pcDNA6.0-TNFR2196MET和pcDNA6.0-TNFR2196ARG真覈錶達質粒,轉化到Ecoli感受態中,篩選暘性剋隆行菌液PCR和雙酶切及測序鑒定.結果 酶切鑒定和測序分析驗證TNFR2基因196MET和196ARG錶達載體構建成功.結論 成功構建錶達載體為下一步心血管疾病研究奠定瞭實驗基礎.
목적 구건진핵표체질립pcDNA6.0-TNFR2196MET화pcDNA6.0-TNFR2196ARG.방법 인공합성TNFR2196MET목적 편단,여pMD18-T simple 재체련접형성극륭재체,재통과설계돌변인물,PCR정점돌변확증출함유돌변위점적질립,전화도장애희균감수태세포JM109중,통과안변청매소항약성사선출성공전화적양성극륭,병진행확증.추제질립진행측서감정,득도pMD18-T simple-TNFR2196ARG.쌍매절pMD18-T simple-TN-FR2196MET、pMD18-T simple-TNFR2196ARG급pcDNA6.0,장TNFR2196MET、TNFR2196ARG삽입pcDNA6.0선성질립,즉구건성pcDNA6.0-TNFR2196MET화pcDNA6.0-TNFR2196ARG진핵표체질립,전화도Ecoli감수태중,사선양성극륭행균액PCR화쌍매절급측서감정.결과 매절감정화측서분석험증TNFR2기인196MET화196ARG표체재체구건성공.결론 성공구건표체재체위하일보심혈관질병연구전정료실험기출.
