CAJ | 학술논문

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)/转化生长因子β(TGF-β)/Sma和Mad相关蛋白(Smads)信号级联在左归丸含药血清干预成骨前体细胞系MC3T3-E1细胞增殖与分化中的作用.方法:以倍美力为阳性对照药,对Sprague-Dawley (SD)雌性大鼠灌服高、中、低剂量的左归丸混悬液,7 d后腹主动脉取血分离含药血清.采用噻唑蓝(MTT)法检测左归丸含药血清对MC3T3-E1细胞的增殖作用,采用改良钙钴染色法检测碱性磷酸酶(ALP)表达,采用茜素红染色法检测钙化结节,采用Western blotting法检测核结合因子α1(Cbfα1)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)蛋白表达,采用real-time RT-PCR法检测TGF-β1、Smad4和Smad2 mRNA表达.结果:左归丸含药血清对MC3T3-E1细胞的促增殖作用呈剂量和时间相关性,其中以低剂量且体积分数为15%作用48 h后对MC3T3-E1的促增殖作用最大;左归丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞ALP表达,增强细胞基质钙化,提高Cbfα1和ColⅠ蛋白分泌,上调TGF-β1、Smad4和Smad2 mRNA表达;加入ERK1/2信号通路特异性阻滞剂PD98059后,MC3T3-E1细胞增殖降低,ALP表达下降,细胞基质钙化减弱,Cbfα1和ColⅠ蛋白分泌降低,Smad4和Smad2 mRNA表达下调,TGF-β1 mRNA表达进一步上调.结论:左归丸可能通过干预ERK/TGF-β/Smads信号级联而调控成骨细胞的增殖和分化,这可能是其防治骨质疏松症的机制之一.
목적:연구세포외신호조절격매(ERK)/전화생장인자β(TGF-β)/Sma화Mad상관단백(Smads)신호급련재좌귀환함약혈청간예성골전체세포계MC3T3-E1세포증식여분화중적작용.방법:이배미력위양성대조약,대Sprague-Dawley (SD)자성대서관복고、중、저제량적좌귀환혼현액,7 d후복주동맥취혈분리함약혈청.채용새서람(MTT)법검측좌귀환함약혈청대MC3T3-E1세포적증식작용,채용개량개고염색법검측감성린산매(ALP)표체,채용천소홍염색법검측개화결절,채용Western blotting법검측핵결합인자α1(Cbfα1)화Ⅰ형효원(ColⅠ)단백표체,채용real-time RT-PCR법검측TGF-β1、Smad4화Smad2 mRNA표체.결과:좌귀환함약혈청대MC3T3-E1세포적촉증식작용정제량화시간상관성,기중이저제량차체적분수위15%작용48 h후대MC3T3-E1적촉증식작용최대;좌귀환함약혈청능촉진MC3T3-E1세포ALP표체,증강세포기질개화,제고Cbfα1화ColⅠ단백분비,상조TGF-β1、Smad4화Smad2 mRNA표체;가입ERK1/2신호통로특이성조체제PD98059후,MC3T3-E1세포증식강저,ALP표체하강,세포기질개화감약,Cbfα1화ColⅠ단백분비강저,Smad4화Smad2 mRNA표체하조,TGF-β1 mRNA표체진일보상조.결론:좌귀환가능통과간예ERK/TGF-β/Smads신호급련이조공성골세포적증식화분화,저가능시기방치골질소송증적궤제지일.