CAJ | 학술논문

背景与目的:比较基因组杂交 (comparative genomic hybridization,CGH)是一种在荧光原位杂交 (FISH)技术上发展起来的,用于检测两个基因组间相对 DNA拷贝数的改变(缺失或扩增),并将这些变化在染色体上进行定位的分子细胞遗传学方法.为全面了解鼻咽癌耐药细胞与药物敏感细胞在基因组 DNA水平上可能存在的差异,以及这种差异在肿瘤耐药性产生中的意义,我们用 CGH技术对鼻咽癌耐药细胞系( CNE2/DDP)和其亲代药物敏感细胞( CNE2)的基因组 DNA进行检测和分析.方法:提取两种癌细胞及正常胎盘组织的基因组 DNA,以随机引物法进行荧光标记( CNE2/DDP和 CNE2 DNA以 Fluorescein-12-dUTP标记,探针显绿色荧光;正常胎盘组织以 Tetramethylrhodamine-5-dUTP标记,探针显红色荧光),将标记的 DNA探针同时与正常淋巴细胞分裂中期染色体进行杂交,杂交信号在荧光显微镜下经 CCD( charge coupled device)摄像装置摄取,并通过荧光数字图像分析系统( quips CGH program)进行数据处理,计算两种荧光的比率并绘制分析图.结果: CNE2细胞存在广泛的染色体改变,主要表现在 1q, 3q, 5p, 6p, 7p, 8q, 9q, 11p, 12q, 19q的扩增和 4q, 12p, 13p, 14p, 15p, 18, 20q, 21p, 22的缺失.从 CNE2诱导的耐药细胞系 CNE2/DDP恒定表现为 8q, 19q的扩增和 8p的缺失,其它的染色体均未发现明显异常的扩增或缺失.将 CNE2/DDP在不含药物的培养基中连续传代培养 1个月后重复 CGH,发现与连续药物处理的 CNE2/DDP结果一致. CNE2/DDP细胞较 CNE2细胞具有更为正常和稳定的染色体组成.结论: CNE2/DDP细胞是在耐药诱导过程中选择出来的单一的耐药细胞克隆.肿瘤细胞耐药的产生主要是一个克隆选择过程,即被诱导产生了耐药的细胞克隆在有药物存在的生存压力下被选择出来.
배경여목적:비교기인조잡교 (comparative genomic hybridization,CGH)시일충재형광원위잡교 (FISH)기술상발전기래적,용우검측량개기인조간상대 DNA고패수적개변(결실혹확증),병장저사변화재염색체상진행정위적분자세포유전학방법.위전면료해비인암내약세포여약물민감세포재기인조 DNA수평상가능존재적차이,이급저충차이재종류내약성산생중적의의,아문용 CGH기술대비인암내약세포계( CNE2/DDP)화기친대약물민감세포( CNE2)적기인조 DNA진행검측화분 석.방법:제취량충암세포급정상태반조직적기인조 DNA,이수궤인물법진행형광표기( CNE2/DDP화 CNE2 DNA이 Fluorescein-12-dUTP표기,탐침현록색형광;정상태반조직이 Tetramethylrhodamine-5-dUTP표기,탐침현홍색형광),장표기적 DNA탐침동시여정상림파세포분렬중기염색체진행잡교,잡교신호재형광현미경하경 CCD( charge coupled device)섭상장치섭취,병통과형광수자도상분석계통( quips CGH program)진행수거처리,계산량충형광적비솔병회제분석도.결과: CNE2세포존재엄범적염색체개변,주요표현재 1q, 3q, 5p, 6p, 7p, 8q, 9q, 11p, 12q, 19q적확증화 4q, 12p, 13p, 14p, 15p, 18, 20q, 21p, 22적결실.종 CNE2유도적내약세포계 CNE2/DDP항정표현위 8q, 19q적확증화 8p적결실,기타적염색체균미발현명현이상적확증혹결실.장 CNE2/DDP재불함약물적배양기중련속전대배양 1개월후중복 CGH,발현여련속약물처리적 CNE2/DDP결과일치. CNE2/DDP세포교 CNE2세포구유경위정상화은정적염색체조성.결론: CNE2/DDP세포시재내약유도과정중선택출래적단일적내약세포극륭.종류세포내약적산생주요시일개극륭선택과정,즉피유도산생료내약적세포극륭재유약물존재적생존압력하피선택출래.