生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2005年
6期
853-857
,共5页
吕猛%王昆%曹志贱%蒋达和%毛歆%李文鑫
呂猛%王昆%曹誌賤%蔣達和%毛歆%李文鑫
려맹%왕곤%조지천%장체화%모흠%리문흠
蝎毒素%BmαTX14%基因组织结构%毕赤酵母%真核表达
蝎毒素%BmαTX14%基因組織結構%畢赤酵母%真覈錶達
갈독소%BmαTX14%기인조직결구%필적효모%진핵표체
以东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch,BmK)BmαTX14全长cDNA序列设计引物,克隆BmαTX14成熟肽,插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中,转化酵母,诱导表达.Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析显示,表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中,诱导84h时的表达量达到高峰,约为120mg/L.通过Ni金属螯合层析柱亲和层析、聚乙二醇沉淀、凝胶分子筛层析获得纯化的rBmαTX14融合蛋白,经毒性实验表明,具有明显的抗昆虫活性.同时以蝎基因组总DNA为模板进行PCR扩增,得到BmαTX14基因克隆,序列分析显示:BmαTX14在编码信号肽的基因序列中有1个长408bp的内含子,其基因组织结构具有α型Na+通道毒素的特征.从功能活性和基因组织结构两个角度证实BmαTX14为α型№+通道毒素.
以東亞鉗蝎(Buthus martensii Karsch,BmK)BmαTX14全長cDNA序列設計引物,剋隆BmαTX14成熟肽,插入畢赤酵母錶達載體pPIC9K中,轉化酵母,誘導錶達.Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析顯示,錶達產物以可溶性分子形式存在于培養上清中,誘導84h時的錶達量達到高峰,約為120mg/L.通過Ni金屬螯閤層析柱親和層析、聚乙二醇沉澱、凝膠分子篩層析穫得純化的rBmαTX14融閤蛋白,經毒性實驗錶明,具有明顯的抗昆蟲活性.同時以蝎基因組總DNA為模闆進行PCR擴增,得到BmαTX14基因剋隆,序列分析顯示:BmαTX14在編碼信號肽的基因序列中有1箇長408bp的內含子,其基因組織結構具有α型Na+通道毒素的特徵.從功能活性和基因組織結構兩箇角度證實BmαTX14為α型№+通道毒素.
이동아겸갈(Buthus martensii Karsch,BmK)BmαTX14전장cDNA서렬설계인물,극륭BmαTX14성숙태,삽입필적효모표체재체pPIC9K중,전화효모,유도표체.Tricine-SDS-PAGE화Western blot분석현시,표체산물이가용성분자형식존재우배양상청중,유도84h시적표체량체도고봉,약위120mg/L.통과Ni금속오합층석주친화층석、취을이순침정、응효분자사층석획득순화적rBmαTX14융합단백,경독성실험표명,구유명현적항곤충활성.동시이갈기인조총DNA위모판진행PCR확증,득도BmαTX14기인극륭,서렬분석현시:BmαTX14재편마신호태적기인서렬중유1개장408bp적내함자,기기인조직결구구유α형Na+통도독소적특정.종공능활성화기인조직결구량개각도증실BmαTX14위α형№+통도독소.
