暨南大学学报（自然科学与医学版）
暨南大學學報（自然科學與醫學版）
기남대학학보（자연과학여의학판）
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION）
2006年
4期
509-514
,共6页
李丰耀%徐丽慧%迟晓云%查庆兵%贾仟涛%何贤辉
李豐耀%徐麗慧%遲曉雲%查慶兵%賈仟濤%何賢輝
리봉요%서려혜%지효운%사경병%가천도%하현휘
免疫学%高频等位基因HLA-A*1101%生物素化酶底物肽%融合蛋白%原核表达%包涵体
免疫學%高頻等位基因HLA-A*1101%生物素化酶底物肽%融閤蛋白%原覈錶達%包涵體
면역학%고빈등위기인HLA-A*1101%생물소화매저물태%융합단백%원핵표체%포함체
目的:构建HLA-A*1101重链胞外域羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的融合蛋白(HLA-A11-BSP)原核表达载体,并在大肠杆菌中表达该融合蛋白.方法:以RT-PCR法扩增并克隆HLA-A*1101重链基因的cDNA,以PCR方法构建HLA-A11-BSP的表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并以免疫印迹法进行鉴定.结果:从HLA-A2阴性的供者外周血单个核细胞中克隆到HLA-A*1101重链基因的cDNA,以此cDNA为模板,将编码HLA-A*1101重链胞外域1～276序列与编码BSP的序列融合,构建HLA-A11-BSP融合蛋白表达载体,重组质粒经测序验证.融合蛋白在BL21(DE3)中诱导后获得高效表达,约占菌体总蛋白的20%;其相对分子质量约为35 000,与理论值一致.免疫印迹分析显示表达产物主要存在于包涵体中,上清液中几乎无任何产物存在.结论:成功构建表达HLA-A11-BSP融合蛋白的原核表达载体,该融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式获得高水平表达.
目的:構建HLA-A*1101重鏈胞外域羧基耑融閤生物素化酶BirA底物肽(BSP)的融閤蛋白(HLA-A11-BSP)原覈錶達載體,併在大腸桿菌中錶達該融閤蛋白.方法:以RT-PCR法擴增併剋隆HLA-A*1101重鏈基因的cDNA,以PCR方法構建HLA-A11-BSP的錶達載體,在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導錶達,併以免疫印跡法進行鑒定.結果:從HLA-A2陰性的供者外週血單箇覈細胞中剋隆到HLA-A*1101重鏈基因的cDNA,以此cDNA為模闆,將編碼HLA-A*1101重鏈胞外域1～276序列與編碼BSP的序列融閤,構建HLA-A11-BSP融閤蛋白錶達載體,重組質粒經測序驗證.融閤蛋白在BL21(DE3)中誘導後穫得高效錶達,約佔菌體總蛋白的20%;其相對分子質量約為35 000,與理論值一緻.免疫印跡分析顯示錶達產物主要存在于包涵體中,上清液中幾乎無任何產物存在.結論:成功構建錶達HLA-A11-BSP融閤蛋白的原覈錶達載體,該融閤蛋白在大腸桿菌中以包涵體形式穫得高水平錶達.
목적:구건HLA-A*1101중련포외역최기단융합생물소화매BirA저물태(BSP)적융합단백(HLA-A11-BSP)원핵표체재체,병재대장간균중표체해융합단백.방법:이RT-PCR법확증병극륭HLA-A*1101중련기인적cDNA,이PCR방법구건HLA-A11-BSP적표체재체,재대장간균BL21(DE3)중유도표체,병이면역인적법진행감정.결과:종HLA-A2음성적공자외주혈단개핵세포중극륭도HLA-A*1101중련기인적cDNA,이차cDNA위모판,장편마HLA-A*1101중련포외역1～276서렬여편마BSP적서렬융합,구건HLA-A11-BSP융합단백표체재체,중조질립경측서험증.융합단백재BL21(DE3)중유도후획득고효표체,약점균체총단백적20%;기상대분자질량약위35 000,여이론치일치.면역인적분석현시표체산물주요존재우포함체중,상청액중궤호무임하산물존재.결론:성공구건표체HLA-A11-BSP융합단백적원핵표체재체,해융합단백재대장간균중이포함체형식획득고수평표체.
