昆虫知识
昆蟲知識
곤충지식
ENTOMOLOGICAL KNOWLEDGE
2009年
2期
223-229
,共7页
涂洪涛%付晓伟%郭线茹%李为争%罗梅浩%原国辉
塗洪濤%付曉偉%郭線茹%李為爭%囉梅浩%原國輝
도홍도%부효위%곽선여%리위쟁%라매호%원국휘
烟夜蛾%几丁质酶%基因克隆%原核表达
煙夜蛾%幾丁質酶%基因剋隆%原覈錶達
연야아%궤정질매%기인극륭%원핵표체
运用RT-PCR技术扩增编码烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guen閑)幼虫几丁质酶基因的cDNA片段,将其克隆至pMD18-T载体,获得该基因的成熟蛋白阅读框序列.将该基因重组到表达型质粒pGEX-4T-2中,并转化入原核细胞中表达,序列测定结果表明,烟夜蛾幼虫几丁质酶基因的成熟蛋白阅读框全长1 338 bp,编码445个氨基酸残基,预测分子量和等电点分别为50.1 kDa和9.26;推导的氨基酸序列与其近缘种棉铃虫几丁质酶氨基酸序列的一致性达99%,与其他6种昆虫几丁质酶的氨基酸序列也高度一致(65%～76%),并具有几丁质酶的典型特征.将该基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-2上并转化B121,SDS-PAGE和Western印迹分析表明,经IPTG诱导,76 kDa附近没有特异蛋白条带出现,表明烟夜蛾几丁质酶基因不能在原核表达载体pGEX-4T-2中表达.
運用RT-PCR技術擴增編碼煙夜蛾Helicoverpa assulta(Guen閑)幼蟲幾丁質酶基因的cDNA片段,將其剋隆至pMD18-T載體,穫得該基因的成熟蛋白閱讀框序列.將該基因重組到錶達型質粒pGEX-4T-2中,併轉化入原覈細胞中錶達,序列測定結果錶明,煙夜蛾幼蟲幾丁質酶基因的成熟蛋白閱讀框全長1 338 bp,編碼445箇氨基痠殘基,預測分子量和等電點分彆為50.1 kDa和9.26;推導的氨基痠序列與其近緣種棉鈴蟲幾丁質酶氨基痠序列的一緻性達99%,與其他6種昆蟲幾丁質酶的氨基痠序列也高度一緻(65%～76%),併具有幾丁質酶的典型特徵.將該基因剋隆到原覈錶達載體pGEX-4T-2上併轉化B121,SDS-PAGE和Western印跡分析錶明,經IPTG誘導,76 kDa附近沒有特異蛋白條帶齣現,錶明煙夜蛾幾丁質酶基因不能在原覈錶達載體pGEX-4T-2中錶達.
운용RT-PCR기술확증편마연야아Helicoverpa assulta(Guen한)유충궤정질매기인적cDNA편단,장기극륭지pMD18-T재체,획득해기인적성숙단백열독광서렬.장해기인중조도표체형질립pGEX-4T-2중,병전화입원핵세포중표체,서렬측정결과표명,연야아유충궤정질매기인적성숙단백열독광전장1 338 bp,편마445개안기산잔기,예측분자량화등전점분별위50.1 kDa화9.26;추도적안기산서렬여기근연충면령충궤정질매안기산서렬적일치성체99%,여기타6충곤충궤정질매적안기산서렬야고도일치(65%～76%),병구유궤정질매적전형특정.장해기인극륭도원핵표체재체pGEX-4T-2상병전화B121,SDS-PAGE화Western인적분석표명,경IPTG유도,76 kDa부근몰유특이단백조대출현,표명연야아궤정질매기인불능재원핵표체재체pGEX-4T-2중표체.
