植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2010年
6期
587-592
,共6页
孙润红%于祥泉%陶烨%杨洋%吴云锋%张银武%李艳
孫潤紅%于祥泉%陶燁%楊洋%吳雲鋒%張銀武%李豔
손윤홍%우상천%도엽%양양%오운봉%장은무%리염
小麦蓝矮植原表体%免疫膜蛋白%跨膜区
小麥藍矮植原錶體%免疫膜蛋白%跨膜區
소맥람왜식원표체%면역막단백%과막구
根据跨膜区预测结果,设计ImpF1/ImpR1和ImpP2/ImpR2两对特异性引物.以ImpF1/ImpR1,ImpF1/ImpR2,Imp-F2/ImpR1和ImpF2/ImpR2共4个组合经PCR扩增得到4个目标片段,即:免疫膜蛋白Imp基因的全长(Imp-B);切除C-端跨膜区的Imp基因的基因序列(Imp-N);切除N-端跨膜区的Imp基因的基因序列(Imp-C);切除N-和C-端跨膜区的Imp基因的基因序列(Imp-S).经酶切连接到原核表达载体Pmal-c2x,并转入E.coli BL21(DE3)PlysS菌株中.SDS-PAGE电泳验证,只有切除N-、C-端跨膜区的Imp基因的基因序列(Imp-S)得到大量表达,结果表明:小麦蓝矮植原体免疫膜蛋白的跨膜区影响其在大肠杆菌中的表达.
根據跨膜區預測結果,設計ImpF1/ImpR1和ImpP2/ImpR2兩對特異性引物.以ImpF1/ImpR1,ImpF1/ImpR2,Imp-F2/ImpR1和ImpF2/ImpR2共4箇組閤經PCR擴增得到4箇目標片段,即:免疫膜蛋白Imp基因的全長(Imp-B);切除C-耑跨膜區的Imp基因的基因序列(Imp-N);切除N-耑跨膜區的Imp基因的基因序列(Imp-C);切除N-和C-耑跨膜區的Imp基因的基因序列(Imp-S).經酶切連接到原覈錶達載體Pmal-c2x,併轉入E.coli BL21(DE3)PlysS菌株中.SDS-PAGE電泳驗證,隻有切除N-、C-耑跨膜區的Imp基因的基因序列(Imp-S)得到大量錶達,結果錶明:小麥藍矮植原體免疫膜蛋白的跨膜區影響其在大腸桿菌中的錶達.
근거과막구예측결과,설계ImpF1/ImpR1화ImpP2/ImpR2량대특이성인물.이ImpF1/ImpR1,ImpF1/ImpR2,Imp-F2/ImpR1화ImpF2/ImpR2공4개조합경PCR확증득도4개목표편단,즉:면역막단백Imp기인적전장(Imp-B);절제C-단과막구적Imp기인적기인서렬(Imp-N);절제N-단과막구적Imp기인적기인서렬(Imp-C);절제N-화C-단과막구적Imp기인적기인서렬(Imp-S).경매절련접도원핵표체재체Pmal-c2x,병전입E.coli BL21(DE3)PlysS균주중.SDS-PAGE전영험증,지유절제N-、C-단과막구적Imp기인적기인서렬(Imp-S)득도대량표체,결과표명:소맥람왜식원체면역막단백적과막구영향기재대장간균중적표체.
