CAJ | 학술논문

目的针对NM_001025250.3,NM_001025257.3,NM_009505.4,构建4个针对靶基因小鼠VEGFA(血管内皮生长因子A)的小干扰RNA(siRNA)干扰载体,并将其重组转成慢病毒载体.方法根据靶基因设计并合成4对siRNA干抚序列,将siRNA干扰序列克隆到pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体中,构建4个干扰质粒,转化入感受态细胞DH5α.干扰载体瞬时转染靶细胞同时设阴性对照质粒组和不转染组,并通过qPCR方法检测干扰载体对靶基因的干扰效果.使用Gateway重组技术将筛选出的干扰质粒pcDNATM6.2-GW/EmGFPmi-MR2构建慢病毒表达载体pLentii6.3-VEGFA-MR2.用构建的慢病毒表达载体和包装质粒(packaging mix)共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度.结果成功构建针对靶基因的4个干扰质粒分别为:pcDNATM6.2-GW/EmGFPmi-MR1,pcDNATM6.2-GW/EmGFPmi-MR2,pcDNATM6.2-GW/EmGFPmi-MR3和pcDNATM6.2-GW/EmGFPmi-MR4;其中MR2干扰载体的基因沉默效果最佳,干扰质粒转染小鼠肺癌细胞LLC后,检测干扰载体对于靶基因的沉默效果为58.43%;慢病毒滴度为7.5×10(8)TU/ml.结论成功构建、筛选针对小鼠VEGFA基因沉默的特异性siRNA慢病毒.
목적 침대NM_001025250.3,NM_001025257.3,NM_009505.4,구건4개침대파기인소서VEGFA(혈관내피생장인자A)적소간우RNA(siRNA)간우재체,병장기중조전성만병독재체.방법 근거파기인설계병합성4대siRNA간무서렬,장siRNA간우서렬극륭도pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR재체중,구건4개간우질립,전화입감수태세포DH5α.간우재체순시전염파세포동시설음성대조질립조화불전염조,병통과qPCR방법검측간우재체대파기인적간우효과.사용Gateway중조기술장사선출적간우질립pcDNATM6.2-GW/EmGFPmi-MR2구건만병독표체재체pLentii6.3-VEGFA-MR2.용구건적만병독표체재체화포장질립(packaging mix)공전염293T세포,포장병독,수집병독원액,초속리심농축,병측정적도.결과 성공구건침대파기인적4개간우질립분별위:pcDNATM6.2-GW/EmGFPmi-MR1,pcDNATM6.2-GW/EmGFPmi-MR2,pcDNATM6.2-GW/EmGFPmi-MR3화pcDNATM6.2-GW/EmGFPmi-MR4;기중MR2간우재체적기인침묵효과최가,간우질립전염소서폐암세포LLC후,검측간우재체대우파기인적침묵효과위58.43%;만병독적도위7.5×10(8)TU/ml.결론 성공구건、사선침대소서VEGFA기인침묵적특이성siRNA만병독.