中南大学学报（医学版）
中南大學學報（醫學版）
중남대학학보（의학판）
JOURNAL OF CENTRAL SOUTH UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCES)
2012年
5期
447-452
,共6页
李敏超%尤列·皮尔曼%周向东
李敏超%尤列·皮爾曼%週嚮東
리민초%우렬·피이만%주향동
豆蔻酰化富丙氨酸激酶C底物%瞬时受体电位melastatin离子通道%黏蛋白类
豆蔻酰化富丙氨痠激酶C底物%瞬時受體電位melastatin離子通道%黏蛋白類
두구선화부병안산격매C저물%순시수체전위melastatin리자통도%점단백류
目的:构建豆蔻酰化富丙氨酸激酶c底物(MARCKS)磷酸化位点(PSD)突变体,并探讨瞬时受体电位M8离子通道(TRPM8)及MARCKS在冷刺激诱导黏蛋白(MUC)5AC合成及胞吐过程中发挥的作用.方法:利用PCR克隆全编码MARCKS目的基因,并通过定点突变技术将PSD的4个丝氨酸突变为天冬氨酸编码基因.将野生型及突变体cDNA亚克隆至pcDNA3.0载体后用酶切及DNA测序鉴定.以TRPM8特异性阻断剂BCTC、重组突变质粒转染人气道上皮16HBE细胞为干预手段,用免疫荧光及ELISA检测二者对冷空气刺激诱导的16HBE细胞合成及分泌MUC5AC的影响.结果:成功构建了pcDNA3.0-MARCKS重组质粒及pcDNA3.0-MARCKS-PSD突变体.冷刺激组胞内合成及分泌MUC5AC水平显著高于未刺激对照组(P＜0.05).与冷刺激组比较,BCTC可显著抑制由冷刺激诱导的MUC5AC合成及分泌(P＜0.05)；与冷刺激组比较,转染MARCKS-PSD突变cDNA可显著下调由冷刺激诱导的MUC5AC高分泌水平(P＜0.05),同时胞内的MUC5AC水平与对照组比较呈现显著升高状态(P＜0.01),而转染载体及野生型MARCKS对冷刺激诱导的MUC5AC胞内合成及胞外分泌水平无显著影响(p＞0.05).结论:TRPM8及MARCKSPSD的磷酸化过程介导了冷刺激诱导气道上皮细胞内MUC5AC的胞吐过程.
目的:構建豆蔻酰化富丙氨痠激酶c底物(MARCKS)燐痠化位點(PSD)突變體,併探討瞬時受體電位M8離子通道(TRPM8)及MARCKS在冷刺激誘導黏蛋白(MUC)5AC閤成及胞吐過程中髮揮的作用.方法:利用PCR剋隆全編碼MARCKS目的基因,併通過定點突變技術將PSD的4箇絲氨痠突變為天鼕氨痠編碼基因.將野生型及突變體cDNA亞剋隆至pcDNA3.0載體後用酶切及DNA測序鑒定.以TRPM8特異性阻斷劑BCTC、重組突變質粒轉染人氣道上皮16HBE細胞為榦預手段,用免疫熒光及ELISA檢測二者對冷空氣刺激誘導的16HBE細胞閤成及分泌MUC5AC的影響.結果:成功構建瞭pcDNA3.0-MARCKS重組質粒及pcDNA3.0-MARCKS-PSD突變體.冷刺激組胞內閤成及分泌MUC5AC水平顯著高于未刺激對照組(P＜0.05).與冷刺激組比較,BCTC可顯著抑製由冷刺激誘導的MUC5AC閤成及分泌(P＜0.05)；與冷刺激組比較,轉染MARCKS-PSD突變cDNA可顯著下調由冷刺激誘導的MUC5AC高分泌水平(P＜0.05),同時胞內的MUC5AC水平與對照組比較呈現顯著升高狀態(P＜0.01),而轉染載體及野生型MARCKS對冷刺激誘導的MUC5AC胞內閤成及胞外分泌水平無顯著影響(p＞0.05).結論:TRPM8及MARCKSPSD的燐痠化過程介導瞭冷刺激誘導氣道上皮細胞內MUC5AC的胞吐過程.
목적:구건두구선화부병안산격매c저물(MARCKS)린산화위점(PSD)돌변체,병탐토순시수체전위M8리자통도(TRPM8)급MARCKS재랭자격유도점단백(MUC)5AC합성급포토과정중발휘적작용.방법:이용PCR극륭전편마MARCKS목적기인,병통과정점돌변기술장PSD적4개사안산돌변위천동안산편마기인.장야생형급돌변체cDNA아극륭지pcDNA3.0재체후용매절급DNA측서감정.이TRPM8특이성조단제BCTC、중조돌변질립전염인기도상피16HBE세포위간예수단,용면역형광급ELISA검측이자대랭공기자격유도적16HBE세포합성급분비MUC5AC적영향.결과:성공구건료pcDNA3.0-MARCKS중조질립급pcDNA3.0-MARCKS-PSD돌변체.랭자격조포내합성급분비MUC5AC수평현저고우미자격대조조(P＜0.05).여랭자격조비교,BCTC가현저억제유랭자격유도적MUC5AC합성급분비(P＜0.05)；여랭자격조비교,전염MARCKS-PSD돌변cDNA가현저하조유랭자격유도적MUC5AC고분비수평(P＜0.05),동시포내적MUC5AC수평여대조조비교정현현저승고상태(P＜0.01),이전염재체급야생형MARCKS대랭자격유도적MUC5AC포내합성급포외분비수평무현저영향(p＞0.05).결론:TRPM8급MARCKSPSD적린산화과정개도료랭자격유도기도상피세포내MUC5AC적포토과정.
