CAJ | 학술논문

旨在克隆徐淮山羊心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因的cDNA,探讨其生物信息学功能.通过EGFP融合蛋白对该基因亚细胞水平的表达定位,探究该基因在异种生物体内表达情况,探索制备异种转基因动物的可能性.采用反转录PCR(RT-PCR)方法克隆徐淮山羊H-FABP基因cDNA,进行生物信息学分析,构建其融合表达载体pEGFP-H-FABP.脂质体(LTX)介导基因转染山羊成纤维细胞(GEF),48 h后进行荧光检测,RT-PCR检测mRNA在细胞内的表达.利用睾丸注射将目的基因转入小鼠体内,在DNA和蛋白水平上检测目的基因的表达情况.结果,徐淮山羊H-FABP基因完整编码区(CDS)大小为402 bp,编码133个氨基酸,GenBank登录号为AY466498.1.徐淮山羊H-FABP序列与人、鸡、褐家鼠、奶牛、野猪、驴及斑马鱼相应编码区同源性为89％、76％、85％、84％、93％、91％、70％,氨基酸序列同源性为90％、79％、88％、97％、95％、94％、72％.成功构建融合表达载体pEGFP- H-FABP,目的基因在mRNA水平上成功表达.目的蛋白定位于细胞质中,与在线预测结果相同(无信号肽,定位于细胞质中).通过尾静脉注射和睾丸注射,该基因可以在小鼠体内实现暂态表达和持续性表达.本研究成功克隆了徐淮山羊H-FABP基因cDNA,而且H-FABP基因在进化过程中是保守的.该蛋白无信号肽,在单细胞水平上可表达于细胞质中,在小鼠体内也可以成功表达.
지재극륭서회산양심장형지방산결합단백(H-FABP)기인적cDNA,탐토기생물신식학공능.통과EGFP융합단백대해기인아세포수평적표체정위,탐구해기인재이충생물체내표체정황,탐색제비이충전기인동물적가능성.채용반전록PCR(RT-PCR)방법극륭서회산양H-FABP기인cDNA,진행생물신식학분석,구건기융합표체재체pEGFP-H-FABP.지질체(LTX)개도기인전염산양성섬유세포(GEF),48 h후진행형광검측,RT-PCR검측mRNA재세포내적표체.이용고환주사장목적기인전입소서체내,재DNA화단백수평상검측목적기인적표체정황.결과,서회산양H-FABP기인완정편마구(CDS)대소위402 bp,편마133개안기산,GenBank등록호위AY466498.1.서회산양H-FABP서렬여인、계、갈가서、내우、야저、려급반마어상응편마구동원성위89％、76％、85％、84％、93％、91％、70％,안기산서렬동원성위90％、79％、88％、97％、95％、94％、72％.성공구건융합표체재체pEGFP- H-FABP,목적기인재mRNA수평상성공표체.목적단백정위우세포질중,여재선예측결과상동(무신호태,정위우세포질중).통과미정맥주사화고환주사,해기인가이재소서체내실현잠태표체화지속성표체.본연구성공극륭료서회산양H-FABP기인cDNA,이차H-FABP기인재진화과정중시보수적.해단백무신호태,재단세포수평상가표체우세포질중,재소서체내야가이성공표체.