中华消化杂志
中華消化雜誌
중화소화잡지
Chinese Journal of Digestion
2007年
10期
675-678
,共4页
徐灿%李兆申%杜奕奇%屠振兴%龚燕芳%许国铭
徐燦%李兆申%杜奕奇%屠振興%龔燕芳%許國銘
서찬%리조신%두혁기%도진흥%공연방%허국명
白细胞介素-2%疫苗,DNA%螺杆菌,幽门
白細胞介素-2%疫苗,DNA%螺桿菌,幽門
백세포개소-2%역묘,DNA%라간균,유문
目的 构建含幽门螺杆菌(Hp)粘附素(HpaA)基因和白细胞介素(IL)-2的核酸疫苗,体外转染COS-7细胞,鉴定其表达蛋白的免疫原性和免疫保护作用.方法 应用聚合酶链反应(PCR)技术从Hp标准菌株CCUG17874基因组DNA扩增HpaA基因;从重组质粒pCIneo-IL-2扩增小鼠IL-2基因,并通过TA克隆分别克隆入pUCmT载体.检测HpaA及IL-2的核苷酸序列,酶切、连接反应将HpaA和IL-2同时克隆入真核表达载体pIRES,再经PCR法和酶切反应进行鉴定;通过脂质体法将重组载体pIRES-HpaA-IL-2转染COS-7细胞,SDS-PAGE及Western印迹法检测表达蛋白的免疫原性.重组载体转化减毒鼠伤寒沙门菌LB5000,抽提质粒,转化入SL7207,反复传代,鉴定重组核酸疫苗菌的稳定性.以该疫苗菌经口接种小鼠,4周后再用Hp攻击,鉴定感染状况.结果 测序结果证实扩增的HpaA基因与HpHpaA序列一致,IL-2序列和小鼠IL-2序列一致.PCR和酶切鉴定结果证实,HpaA和IL-2基因克隆入载体pIRES,成功构建含HpaA和IL-2基因的核酸疫苗质粒pIRES-HpaA-IL-2,Western印迹法检测到相对分子质量分别为30 000和14 000的HpaA和IL-2蛋白条带.小鼠体内实验显示HpaA-IL-2及HpaA组分别有75.0%、58.4%获免疫保护,与PBS组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 成功构建了HpaA和IL-2的Hp减毒沙门核酸疫苗菌,其免疫原性和保护性均得到证实,免疫佐剂IL-2可提高免疫保护率.
目的 構建含幽門螺桿菌(Hp)粘附素(HpaA)基因和白細胞介素(IL)-2的覈痠疫苗,體外轉染COS-7細胞,鑒定其錶達蛋白的免疫原性和免疫保護作用.方法 應用聚閤酶鏈反應(PCR)技術從Hp標準菌株CCUG17874基因組DNA擴增HpaA基因;從重組質粒pCIneo-IL-2擴增小鼠IL-2基因,併通過TA剋隆分彆剋隆入pUCmT載體.檢測HpaA及IL-2的覈苷痠序列,酶切、連接反應將HpaA和IL-2同時剋隆入真覈錶達載體pIRES,再經PCR法和酶切反應進行鑒定;通過脂質體法將重組載體pIRES-HpaA-IL-2轉染COS-7細胞,SDS-PAGE及Western印跡法檢測錶達蛋白的免疫原性.重組載體轉化減毒鼠傷寒沙門菌LB5000,抽提質粒,轉化入SL7207,反複傳代,鑒定重組覈痠疫苗菌的穩定性.以該疫苗菌經口接種小鼠,4週後再用Hp攻擊,鑒定感染狀況.結果 測序結果證實擴增的HpaA基因與HpHpaA序列一緻,IL-2序列和小鼠IL-2序列一緻.PCR和酶切鑒定結果證實,HpaA和IL-2基因剋隆入載體pIRES,成功構建含HpaA和IL-2基因的覈痠疫苗質粒pIRES-HpaA-IL-2,Western印跡法檢測到相對分子質量分彆為30 000和14 000的HpaA和IL-2蛋白條帶.小鼠體內實驗顯示HpaA-IL-2及HpaA組分彆有75.0%、58.4%穫免疫保護,與PBS組差異有統計學意義(P＜0.01).結論 成功構建瞭HpaA和IL-2的Hp減毒沙門覈痠疫苗菌,其免疫原性和保護性均得到證實,免疫佐劑IL-2可提高免疫保護率.
목적 구건함유문라간균(Hp)점부소(HpaA)기인화백세포개소(IL)-2적핵산역묘,체외전염COS-7세포,감정기표체단백적면역원성화면역보호작용.방법 응용취합매련반응(PCR)기술종Hp표준균주CCUG17874기인조DNA확증HpaA기인;종중조질립pCIneo-IL-2확증소서IL-2기인,병통과TA극륭분별극륭입pUCmT재체.검측HpaA급IL-2적핵감산서렬,매절、련접반응장HpaA화IL-2동시극륭입진핵표체재체pIRES,재경PCR법화매절반응진행감정;통과지질체법장중조재체pIRES-HpaA-IL-2전염COS-7세포,SDS-PAGE급Western인적법검측표체단백적면역원성.중조재체전화감독서상한사문균LB5000,추제질립,전화입SL7207,반복전대,감정중조핵산역묘균적은정성.이해역묘균경구접충소서,4주후재용Hp공격,감정감염상황.결과 측서결과증실확증적HpaA기인여HpHpaA서렬일치,IL-2서렬화소서IL-2서렬일치.PCR화매절감정결과증실,HpaA화IL-2기인극륭입재체pIRES,성공구건함HpaA화IL-2기인적핵산역묘질립pIRES-HpaA-IL-2,Western인적법검측도상대분자질량분별위30 000화14 000적HpaA화IL-2단백조대.소서체내실험현시HpaA-IL-2급HpaA조분별유75.0%、58.4%획면역보호,여PBS조차이유통계학의의(P＜0.01).결론 성공구건료HpaA화IL-2적Hp감독사문핵산역묘균,기면역원성화보호성균득도증실,면역좌제IL-2가제고면역보호솔.
