中国农业科学
中國農業科學
중국농업과학
SCIENTIA AGRICULTURA SINICA
2003年
12期
1560-1565
,共6页
王柳%童光志%仇华吉%谷守林%涂亚斌%杨志彪
王柳%童光誌%仇華吉%穀守林%塗亞斌%楊誌彪
왕류%동광지%구화길%곡수림%도아빈%양지표
马传染性贫血病毒%驴白细胞弱毒疫苗株%感染性分子克隆
馬傳染性貧血病毒%驢白細胞弱毒疫苗株%感染性分子剋隆
마전염성빈혈병독%려백세포약독역묘주%감염성분자극륭
采用PCR方法分3段扩增出马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株(EIAV DLA)的前病毒DNA,这3个片段覆盖马传染性贫血病毒的全部基因组,PCR产物经克隆后顺次连接,获得1个含有EIAV全基因(8.0kb)的重组质粒,将其命名为p8.0.将此8.0kb EIAV全基因再亚克隆到含有一完整EIAV DLA株长末端重复序列的质粒中,获得一含有EIAV驴白细胞弱毒前病毒全基因的重组质粒,将其命名为p8.2,经核苷酸序列分析,证明p8.2含有EIAV前病毒的全基因.用p8.2转染驴白细胞,将其作为种毒进行传代,于感染该克隆毒的细胞培养上清中检测出了反转录酶活性,说明在驴白细胞中由p8.2衍生出了EIA病毒.驴白细胞经该克隆毒感染后,第4天出现病变,经透射电镜可观察到典型的马传染性贫血病毒粒子,进一步证明p8.2具有感染性,笔者获得了马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆,为进一步在分子水平上阐明我国EIAV疫苗株的减毒机理和免疫保护机制奠定了基础.
採用PCR方法分3段擴增齣馬傳染性貧血病毒驢白細胞弱毒疫苗株(EIAV DLA)的前病毒DNA,這3箇片段覆蓋馬傳染性貧血病毒的全部基因組,PCR產物經剋隆後順次連接,穫得1箇含有EIAV全基因(8.0kb)的重組質粒,將其命名為p8.0.將此8.0kb EIAV全基因再亞剋隆到含有一完整EIAV DLA株長末耑重複序列的質粒中,穫得一含有EIAV驢白細胞弱毒前病毒全基因的重組質粒,將其命名為p8.2,經覈苷痠序列分析,證明p8.2含有EIAV前病毒的全基因.用p8.2轉染驢白細胞,將其作為種毒進行傳代,于感染該剋隆毒的細胞培養上清中檢測齣瞭反轉錄酶活性,說明在驢白細胞中由p8.2衍生齣瞭EIA病毒.驢白細胞經該剋隆毒感染後,第4天齣現病變,經透射電鏡可觀察到典型的馬傳染性貧血病毒粒子,進一步證明p8.2具有感染性,筆者穫得瞭馬傳染性貧血病毒驢白細胞弱毒疫苗株的感染性分子剋隆,為進一步在分子水平上闡明我國EIAV疫苗株的減毒機理和免疫保護機製奠定瞭基礎.
채용PCR방법분3단확증출마전염성빈혈병독려백세포약독역묘주(EIAV DLA)적전병독DNA,저3개편단복개마전염성빈혈병독적전부기인조,PCR산물경극륭후순차련접,획득1개함유EIAV전기인(8.0kb)적중조질립,장기명명위p8.0.장차8.0kb EIAV전기인재아극륭도함유일완정EIAV DLA주장말단중복서렬적질립중,획득일함유EIAV려백세포약독전병독전기인적중조질립,장기명명위p8.2,경핵감산서렬분석,증명p8.2함유EIAV전병독적전기인.용p8.2전염려백세포,장기작위충독진행전대,우감염해극륭독적세포배양상청중검측출료반전록매활성,설명재려백세포중유p8.2연생출료EIA병독.려백세포경해극륭독감염후,제4천출현병변,경투사전경가관찰도전형적마전염성빈혈병독입자,진일보증명p8.2구유감염성,필자획득료마전염성빈혈병독려백세포약독역묘주적감염성분자극륭,위진일보재분자수평상천명아국EIAV역묘주적감독궤리화면역보호궤제전정료기출.
