CAJ | 학술논문

目的:建立实时荧光TaqManTM定量检测蜡样芽胞杆菌的快速检测方法,为食品中蜡样芽胞杆菌污染的调查及食物中毒的快速准确定量检测提供手段.方法:通过分析蜡样芽胞杆菌16S rDNA、23S rDNA、16S-23S ITS、gyrB、groEL、cereolysin AB、HBL(hblA、hblC、hblD)、NHE(nheA、nheC、nheD)、bce-T等目的基因,对比所选取的不同目的基因优缺点,最终选择合适的目的基因16S-23S ITS进行同源性分析,并根据GenBank公布的蜡样芽胞杆菌16S-23S ITS基因的保守序列,用引物与探针专业设计软件自行设计引物和TaqManTM探针,并利用硅胶模型TM基因组DNA提取法制备DNA标准品,通过对TaqManTM实时荧光PCR退火温度、探针浓度、引物浓度、Mg2+离子浓度、缓冲液浓度及酶用量等反应条件的优化,初步建立蜡样芽胞杆菌的实时荧光TaqManTM快速定量检测方法,并利用该方法对模拟样品进行检测.结果:选取的16S-23S ITS基因同源性达到99%以上,特异性好;所有蜡样芽胞杆菌均含有两段16S-23SITS基因,有利于提高反应的灵敏度.通过对各实验条件的优化,得出蜡样芽胞杆菌TaqManTM实时荧光PCR的最佳反应条件,初步建立起实时荧光TaqManTM定量检测蜡样芽胞杆菌的快速检测方法,该方法能在3 h左右完成整个检测过程.结论:实时荧光TaqManTM定量检测法不但灵敏度好,而且特异性高,检测时间短,能提高蜡样芽胞杆菌的检出率和检测准确性,可望应用于蜡样芽胞杆菌食物中毒的快速准确定量诊断.
목적:건립실시형광TaqManTM정량검측사양아포간균적쾌속검측방법,위식품중사양아포간균오염적조사급식물중독적쾌속준학정량검측제공수단.방법:통과분석사양아포간균16S rDNA、23S rDNA、16S-23S ITS、gyrB、groEL、cereolysin AB、HBL(hblA、hblC、hblD)、NHE(nheA、nheC、nheD)、bce-T등목적기인,대비소선취적불동목적기인우결점,최종선택합괄적목적기인16S-23S ITS진행동원성분석,병근거GenBank공포적사양아포간균16S-23S ITS기인적보수서렬,용인물여탐침전업설계연건자행설계인물화TaqManTM탐침,병이용규효모형TM기인조DNA제취법제비DNA표준품,통과대TaqManTM실시형광PCR퇴화온도、탐침농도、인물농도、Mg2+리자농도、완충액농도급매용량등반응조건적우화,초보건립사양아포간균적실시형광TaqManTM쾌속정량검측방법,병이용해방법대모의양품진행검측.결과:선취적16S-23S ITS기인동원성체도99%이상,특이성호;소유사양아포간균균함유량단16S-23SITS기인,유리우제고반응적령민도.통과대각실험조건적우화,득출사양아포간균TaqManTM실시형광PCR적최가반응조건,초보건립기실시형광TaqManTM정량검측사양아포간균적쾌속검측방법,해방법능재3 h좌우완성정개검측과정.결론:실시형광TaqManTM정량검측법불단령민도호,이차특이성고,검측시간단,능제고사양아포간균적검출솔화검측준학성,가망응용우사양아포간균식물중독적쾌속준학정량진단.