CAJ | 학술논문

目的观察长期低氧对骨肉瘤细胞增殖、分化及骨肉瘤干细胞自我更新能力的影响.方法采用噻吩蓝(MTT)比色法观察低氧对骨肉瘤细胞系MG63增殖的影响.后续试验分为两组:第1组为低氧处理组,将MG63细胞在低氧环境下培养1周后进行实验;第2组为常氧对照组.应用实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测两组骨肉瘤细胞的成骨分化基因(Runx2和OC)、胚胎干细胞标志基因Oct3/4、原癌基因c-Myc及低氧诱导因子(HIF)-1a、2a的表达.采用无血清悬浮球培养法观察并比较两组细胞肉瘤球数目和体积的差异.采用免疫组织化学染色法检测两组细胞中HIF-1a和HIF-2a蛋白的表达.结果培养第6、9天,低氧处理组的光密度(D)值为0.128±0.020、0.700±0.060,分别显著高于常氧对照组的0.073±0.050、0.480±0.120(P值均＜0.05).低氧处理组MG63细胞骨肉瘤球的数目为(24±10.97)个,显著高于常氧对照组的(1 3±3.95)个(P＜0.05);低氧处理组MG63骨肉瘤球的体积显著大于常氧对照组.与常氧对照组比较,低氧处理组细胞的成骨标志基因Runx2和OC均显著下调(P值均＜0.05),胚胎干细胞标志基因Oct3/4和原癌基因c-Myc表达均显著上调(P值均＜0.05),HIF-2α表达显著上调(P＜0.05);免疫组织化学染色检测到MG63细胞中有HIF-1a和HIF-2a蛋白表达.结论长期低氧可促进骨肉瘤细胞MG63的增殖,抑制其成骨分化,并促进骨肉瘤球的自我更新能力,增强其干细胞特性.HIF-2a蛋白可能在这些过程中发挥关键作用.
목적 관찰장기저양대골육류세포증식、분화급골육류간세포자아경신능력적영향.방법 채용새분람(MTT)비색법관찰저양대골육류세포계MG63증식적영향.후속시험분위량조:제1조위저양처리조,장MG63세포재저양배경하배양1주후진행실험;제2조위상양대조조.응용실시정량취합매련반응(real-time PCR)검측량조골육류세포적성골분화기인(Runx2화OC)、배태간세포표지기인Oct3/4、원암기인c-Myc급저양유도인자(HIF)-1a、2a적표체.채용무혈청현부구배양법관찰병비교량조세포육류구수목화체적적차이.채용면역조직화학염색법검측량조세포중HIF-1a화HIF-2a단백적표체.결과 배양제6、9천,저양처리조적광밀도(D)치위0.128±0.020、0.700±0.060,분별현저고우상양대조조적0.073±0.050、0.480±0.120(P치균＜0.05).저양처리조MG63세포골육류구적수목위(24±10.97)개,현저고우상양대조조적(1 3±3.95)개(P＜0.05);저양처리조MG63골육류구적체적현저대우상양대조조.여상양대조조비교,저양처리조세포적성골표지기인Runx2화OC균현저하조(P치균＜0.05),배태간세포표지기인Oct3/4화원암기인c-Myc표체균현저상조(P치균＜0.05),HIF-2α표체현저상조(P＜0.05);면역조직화학염색검측도MG63세포중유HIF-1a화HIF-2a단백표체.결론 장기저양가촉진골육류세포MG63적증식,억제기성골분화,병촉진골육류구적자아경신능력,증강기간세포특성.HIF-2a단백가능재저사과정중발휘관건작용.