CAJ | 학술논문

目的:构建人T细胞免疫球蛋白粘蛋白-4(TIM-4)基因的真核表达载体,用生物信息学分析了解TIM-4蛋白的特性.方法:采用Trizol法从人外周血单个核细胞提取总mRNA,逆转录合成cDNA,以此为模版,两步法RT-PCR扩增TIM-4,将其克隆至表达载体pcDNA3.1(+)中,构建FTIM-4质粒,通过PCR及测序进行鉴定.同时,我们构建pEGFP-N1-TIM-4真核表达载体,并测序鉴定其准确性;将pEGFP-N1-TIM-4质粒转染CHO细胞,用RT-PCR和荧光显微镜证实其表达.应用生物信息学初步分析TIM-4蛋白的物理化学性质、结构域和功能.结果:从逆转录的cDNA扩增出TIM-4;经PCR、酶切鉴定、测序分析表明扩增产物与GenBank提供的序列完全相同.真核表达载体pEGFP-N1-TIM-4在CHO细胞中稳定表达,表达蛋白主要位于细胞质和细胞膜上.生物信息学分析表明TIM-4蛋白为不稳定亲水性蛋白,有1个跨膜螺旋结构,含约10.32%的α-螺旋,29.89%的延伸链,59.79%的不规则卷曲,有1段由24个氨基酸组成的信号肽.亚细胞主要定位于细胞质、细胞核、分泌系统的小囊泡、线粒体、内质网、高尔基体上.功能分析预测该蛋白具有受体和信号转导功能.结论:成功构建TIM-4基因真核表达载体,利用生物信息学分析洞察了TIM-4蛋白的性质,为进一步研究该基因的免疫调节机制奠定了基础.
목적:구건인T세포면역구단백점단백-4(TIM-4)기인적진핵표체재체,용생물신식학분석료해TIM-4단백적특성.방법:채용Trizol법종인외주혈단개핵세포제취총mRNA,역전록합성cDNA,이차위모판,량보법RT-PCR확증TIM-4,장기극륭지표체재체pcDNA3.1(+)중,구건FTIM-4질립,통과PCR급측서진행감정.동시,아문구건pEGFP-N1-TIM-4진핵표체재체,병측서감정기준학성;장pEGFP-N1-TIM-4질립전염CHO세포,용RT-PCR화형광현미경증실기표체.응용생물신식학초보분석TIM-4단백적물이화학성질、결구역화공능.결과:종역전록적cDNA확증출TIM-4;경PCR、매절감정、측서분석표명확증산물여GenBank제공적서렬완전상동.진핵표체재체pEGFP-N1-TIM-4재CHO세포중은정표체,표체단백주요위우세포질화세포막상.생물신식학분석표명TIM-4단백위불은정친수성단백,유1개과막라선결구,함약10.32%적α-라선,29.89%적연신련,59.79%적불규칙권곡,유1단유24개안기산조성적신호태.아세포주요정위우세포질、세포핵、분비계통적소낭포、선립체、내질망、고이기체상.공능분석예측해단백구유수체화신호전도공능.결론:성공구건TIM-4기인진핵표체재체,이용생물신식학분석동찰료TIM-4단백적성질,위진일보연구해기인적면역조절궤제전정료기출.