中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2012年
6期
961-968
,共8页
刘天德%余新%袁荣发%王庆诺%杨志强%邵江华
劉天德%餘新%袁榮髮%王慶諾%楊誌彊%邵江華
류천덕%여신%원영발%왕경낙%양지강%소강화
Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2%细胞分裂周期蛋白25A%细胞周期%肝肿瘤
Rho相關含捲麯螺鏇蛋白激酶2%細胞分裂週期蛋白25A%細胞週期%肝腫瘤
Rho상관함권곡라선단백격매2%세포분렬주기단백25A%세포주기%간종류
目的:探讨肝癌细胞中Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)对细胞周期检查点细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)的调节作用.方法:Western blotting 检测51对肝癌及癌旁组织中Rock2与Cdc25A的蛋白表达情况.构建并筛选shRock2干扰质粒,稳定转染到人肝细胞癌Huh-7和HepG2细胞中,Western blotting检测Cdc25A蛋白表达变化;针对Rock2干扰序列,利用PCR定点突变技术进行碱基突变,构建Rock2突变质粒从而"恢复"Rock2表达,分析Cdc25A蛋白表达变化并用MTT法检测肝癌细胞增殖的改变.Western blotting检测Rock2稳定低表达的肝癌细胞中检查点激酶1(Chk1)和检查点激酶2(Chk2)蛋白的变化,免疫共沉淀及免疫荧光分析Rock2与Cdc25A的相互作用.结果:Rock2与Cdc25A蛋白在肝癌组织中较癌旁组织呈现高表达,而且两者呈正相关.肝癌细胞中稳定低表达Rock2后,Cdc25A蛋白表达明显下降;"恢复"Rock2表达后,Cdc25A蛋白表达增加而且肝癌细胞也出现增殖加快现象.Rock2低表达对Chk1和Chk2蛋白变化无明显影响.免疫共沉淀表明Rock2与Cdc25A直接相互作用,免疫荧光检测表明Rock2与Cdc25A存在共定位.结论:Rock2对细胞周期检查点Cdc25A起直接的正向调控作用,而且不依赖于Chk1/Chk2,可能为肝癌基因表达调控研究提供新的靶基因.
目的:探討肝癌細胞中Rho相關含捲麯螺鏇蛋白激酶2(Rock2)對細胞週期檢查點細胞分裂週期蛋白25A(Cdc25A)的調節作用.方法:Western blotting 檢測51對肝癌及癌徬組織中Rock2與Cdc25A的蛋白錶達情況.構建併篩選shRock2榦擾質粒,穩定轉染到人肝細胞癌Huh-7和HepG2細胞中,Western blotting檢測Cdc25A蛋白錶達變化;針對Rock2榦擾序列,利用PCR定點突變技術進行堿基突變,構建Rock2突變質粒從而"恢複"Rock2錶達,分析Cdc25A蛋白錶達變化併用MTT法檢測肝癌細胞增殖的改變.Western blotting檢測Rock2穩定低錶達的肝癌細胞中檢查點激酶1(Chk1)和檢查點激酶2(Chk2)蛋白的變化,免疫共沉澱及免疫熒光分析Rock2與Cdc25A的相互作用.結果:Rock2與Cdc25A蛋白在肝癌組織中較癌徬組織呈現高錶達,而且兩者呈正相關.肝癌細胞中穩定低錶達Rock2後,Cdc25A蛋白錶達明顯下降;"恢複"Rock2錶達後,Cdc25A蛋白錶達增加而且肝癌細胞也齣現增殖加快現象.Rock2低錶達對Chk1和Chk2蛋白變化無明顯影響.免疫共沉澱錶明Rock2與Cdc25A直接相互作用,免疫熒光檢測錶明Rock2與Cdc25A存在共定位.結論:Rock2對細胞週期檢查點Cdc25A起直接的正嚮調控作用,而且不依賴于Chk1/Chk2,可能為肝癌基因錶達調控研究提供新的靶基因.
목적:탐토간암세포중Rho상관함권곡라선단백격매2(Rock2)대세포주기검사점세포분렬주기단백25A(Cdc25A)적조절작용.방법:Western blotting 검측51대간암급암방조직중Rock2여Cdc25A적단백표체정황.구건병사선shRock2간우질립,은정전염도인간세포암Huh-7화HepG2세포중,Western blotting검측Cdc25A단백표체변화;침대Rock2간우서렬,이용PCR정점돌변기술진행감기돌변,구건Rock2돌변질립종이"회복"Rock2표체,분석Cdc25A단백표체변화병용MTT법검측간암세포증식적개변.Western blotting검측Rock2은정저표체적간암세포중검사점격매1(Chk1)화검사점격매2(Chk2)단백적변화,면역공침정급면역형광분석Rock2여Cdc25A적상호작용.결과:Rock2여Cdc25A단백재간암조직중교암방조직정현고표체,이차량자정정상관.간암세포중은정저표체Rock2후,Cdc25A단백표체명현하강;"회복"Rock2표체후,Cdc25A단백표체증가이차간암세포야출현증식가쾌현상.Rock2저표체대Chk1화Chk2단백변화무명현영향.면역공침정표명Rock2여Cdc25A직접상호작용,면역형광검측표명Rock2여Cdc25A존재공정위.결론:Rock2대세포주기검사점Cdc25A기직접적정향조공작용,이차불의뢰우Chk1/Chk2,가능위간암기인표체조공연구제공신적파기인.
