工业微生物
工業微生物
공업미생물
INDUSTRIAL MICROBIOLOGY
2012年
4期
30-37
,共8页
邱昱%张燎原%魏东芝%周文瑜%沈亚领%储炬%朱家文
邱昱%張燎原%魏東芝%週文瑜%瀋亞領%儲炬%硃傢文
구욱%장료원%위동지%주문유%침아령%저거%주가문
D-乳酸脱氢酶%粘质沙雷氏菌%表达%纯化%酶学性质
D-乳痠脫氫酶%粘質沙雷氏菌%錶達%純化%酶學性質
D-유산탈경매%점질사뢰씨균%표체%순화%매학성질
通过PCR技术从粘质沙雷氏菌H3010基因组DNA中扩增出该D-乳酸脱氢酶基因,连接至pET-28a(+)表达载体,转入大肠杆菌BL21 (DE3)中进行了重组表达,优化了酶纯化的条件,并对其酶学性质进行初步研究.结果表明,获得的该酶编码基因全长993 bp,编码330个氨基酸,大小为37 kDa.经优化表达及纯化条件后重组酶纯度可达90％.酶学性质研究发现,该重组酶最适反应温度为60℃,最适酶促反应pH为7.5(0.2 mol/L磷酸盐缓冲液),37℃下测得对底物丙酮酸的动力学参数Km =3.39 mmol/L,Vmax =6.87 mmol/( mg · min),对辅酶NADH的动力学参数Km=1.43 mmol/L,Vmax=1.61 mmol/( mg· min).为酶法生产D-乳酸及利用代谢工程构建产D-乳酸的基因工程菌打下基础.
通過PCR技術從粘質沙雷氏菌H3010基因組DNA中擴增齣該D-乳痠脫氫酶基因,連接至pET-28a(+)錶達載體,轉入大腸桿菌BL21 (DE3)中進行瞭重組錶達,優化瞭酶純化的條件,併對其酶學性質進行初步研究.結果錶明,穫得的該酶編碼基因全長993 bp,編碼330箇氨基痠,大小為37 kDa.經優化錶達及純化條件後重組酶純度可達90％.酶學性質研究髮現,該重組酶最適反應溫度為60℃,最適酶促反應pH為7.5(0.2 mol/L燐痠鹽緩遲液),37℃下測得對底物丙酮痠的動力學參數Km =3.39 mmol/L,Vmax =6.87 mmol/( mg · min),對輔酶NADH的動力學參數Km=1.43 mmol/L,Vmax=1.61 mmol/( mg· min).為酶法生產D-乳痠及利用代謝工程構建產D-乳痠的基因工程菌打下基礎.
통과PCR기술종점질사뢰씨균H3010기인조DNA중확증출해D-유산탈경매기인,련접지pET-28a(+)표체재체,전입대장간균BL21 (DE3)중진행료중조표체,우화료매순화적조건,병대기매학성질진행초보연구.결과표명,획득적해매편마기인전장993 bp,편마330개안기산,대소위37 kDa.경우화표체급순화조건후중조매순도가체90％.매학성질연구발현,해중조매최괄반응온도위60℃,최괄매촉반응pH위7.5(0.2 mol/L린산염완충액),37℃하측득대저물병동산적동역학삼수Km =3.39 mmol/L,Vmax =6.87 mmol/( mg · min),대보매NADH적동역학삼수Km=1.43 mmol/L,Vmax=1.61 mmol/( mg· min).위매법생산D-유산급이용대사공정구건산D-유산적기인공정균타하기출.
