生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2012年
4期
511-514
,共4页
张谷青%陈微微%熊向华%汪建华%游松%张惟材
張穀青%陳微微%熊嚮華%汪建華%遊鬆%張惟材
장곡청%진미미%웅향화%왕건화%유송%장유재
山梨酮脱氢酶%酮古龙酸菌%原核表达%活性电泳%生物活性
山梨酮脫氫酶%酮古龍痠菌%原覈錶達%活性電泳%生物活性
산리동탈경매%동고룡산균%원핵표체%활성전영%생물활성
目的:克隆酮古龙酸菌Y25的山梨酮脱氢酶基因sndh2,在大肠杆菌中进行表达,并检测表达产物的活性.方法:以酮古龙酸菌Y25基因组DNA为模板,PCR扩增sndh2基因,连接到pET22b表达载体后转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达；对菌体裂解液进行SDS-PAGE分析；以D-木糖为底物,采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后活性染色及DCIP检测法鉴定表达产物的脱氢酶活性.结果:扩增得到1290 bp的山梨酮脱氢酶基因；构建了表达质粒pET22b-sndh2,SDS-PAGE结果显示获得相对分子质量为43.1×103的可溶性表达产物；非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳胶上出现的蓝黑色条带及DCIP检测液颜色的变化说明表达产物在以D-木糖为底物时表现出脱氢酶活性.结论:在大肠杆菌中表达的山梨酮脱氢酶具有生物活性.
目的:剋隆酮古龍痠菌Y25的山梨酮脫氫酶基因sndh2,在大腸桿菌中進行錶達,併檢測錶達產物的活性.方法:以酮古龍痠菌Y25基因組DNA為模闆,PCR擴增sndh2基因,連接到pET22b錶達載體後轉入大腸桿菌BL21(DE3)中,經IPTG誘導錶達；對菌體裂解液進行SDS-PAGE分析；以D-木糖為底物,採用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳後活性染色及DCIP檢測法鑒定錶達產物的脫氫酶活性.結果:擴增得到1290 bp的山梨酮脫氫酶基因；構建瞭錶達質粒pET22b-sndh2,SDS-PAGE結果顯示穫得相對分子質量為43.1×103的可溶性錶達產物；非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳膠上齣現的藍黑色條帶及DCIP檢測液顏色的變化說明錶達產物在以D-木糖為底物時錶現齣脫氫酶活性.結論:在大腸桿菌中錶達的山梨酮脫氫酶具有生物活性.
목적:극륭동고룡산균Y25적산리동탈경매기인sndh2,재대장간균중진행표체,병검측표체산물적활성.방법:이동고룡산균Y25기인조DNA위모판,PCR확증sndh2기인,련접도pET22b표체재체후전입대장간균BL21(DE3)중,경IPTG유도표체；대균체렬해액진행SDS-PAGE분석；이D-목당위저물,채용비변성취병희선알응효전영후활성염색급DCIP검측법감정표체산물적탈경매활성.결과:확증득도1290 bp적산리동탈경매기인；구건료표체질립pET22b-sndh2,SDS-PAGE결과현시획득상대분자질량위43.1×103적가용성표체산물；비변성취병희선알응효전영효상출현적람흑색조대급DCIP검측액안색적변화설명표체산물재이D-목당위저물시표현출탈경매활성.결론:재대장간균중표체적산리동탈경매구유생물활성.
