CAJ | 학술논문

目的建立国人前列腺癌噬菌体Fab抗体片段库,筛选、鉴定抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)的人源Fab抗体可变区的编码基因,为前列腺癌的诊断与基因治疗研究开辟新途径.方法 20例前列腺癌患者外周血分离淋巴细胞,提取其总RNA,经RT-PCR及半套式扩增得到免疫球蛋白全部轻链和重链Fd段基因,克隆进载体pComb3,并电转化大肠杆菌XL1-Blue,构建前列腺癌噬菌体Fab抗体片段库.采用噬菌体表面展示技术,以PSMA原核表达重组子pET30a(+)-PSMA诱导表达并纯化后的PSMA为固相抗原,从噬菌体Fab抗体库中经过"吸附-洗脱-扩增"筛选过程,获得抗原结合活性和特异性较强的PSMA人源Fab可变区抗体基因片段的阳性克隆,并进行免疫检测及序列测定.结果成功构建前列腺癌噬菌体抗体Fab片段库,其轻链及重链Fd段与载体DNA的重组率分别为87%、79%,库容为2.32×107,滴度为8.7×1013 pfu/ml.筛选得到Fab抗体克隆的Fd段基因核苷酸序列为696 bp,编码由232个氨基酸残基组成的多肽,与人免疫球蛋白γ链恒定区的同源性为98%;轻链κ基因核苷酸序列为630 bp,编码由210个氨基酸残基组成的多肽,与κ链恒定区同源性为93%.结论成功构建了前列腺癌噬菌体抗体库,并获得了PSMA人Fab抗体可变区编码基因克隆,该克隆抗体基因具有典型的免疫球蛋白轻链和重链可变区的结构特点,基因编码产物具有与PSMA反应的免疫学活性和特异性.
목적 건입국인전렬선암서균체Fab항체편단고,사선、감정항전렬선특이성막항원(PSMA)적인원Fab항체가변구적편마기인,위전렬선암적진단여기인치료연구개벽신도경.방법 20례전렬선암환자외주혈분리림파세포,제취기총RNA,경RT-PCR급반투식확증득도면역구단백전부경련화중련Fd단기인,극륭진재체pComb3,병전전화대장간균XL1-Blue,구건전렬선암서균체Fab항체편단고.채용서균체표면전시기술,이PSMA원핵표체중조자pET30a(+)-PSMA유도표체병순화후적PSMA위고상항원,종서균체Fab항체고중경과"흡부-세탈-확증"사선과정,획득항원결합활성화특이성교강적PSMA인원Fab가변구항체기인편단적양성극륭,병진행면역검측급서렬측정.결과 성공구건전렬선암서균체항체Fab편단고,기경련급중련Fd단여재체DNA적중조솔분별위87%、79%,고용위2.32×107,적도위8.7×1013 pfu/ml.사선득도Fab항체극륭적Fd단기인핵감산서렬위696 bp,편마유232개안기산잔기조성적다태,여인면역구단백γ련항정구적동원성위98%;경련κ기인핵감산서렬위630 bp,편마유210개안기산잔기조성적다태,여κ련항정구동원성위93%.결론 성공구건료전렬선암서균체항체고,병획득료PSMA인Fab항체가변구편마기인극륭,해극륭항체기인구유전형적면역구단백경련화중련가변구적결구특점,기인편마산물구유여PSMA반응적면역학활성화특이성.