复旦学报(医学版)
複旦學報(醫學版)
복단학보(의학판)
JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY
2004年
1期
32-35
,共4页
孙兴会%张宇清%王霞%侯敏%谭理%李平%朱运松
孫興會%張宇清%王霞%侯敏%譚理%李平%硃運鬆
손흥회%장우청%왕하%후민%담리%리평%주운송
流感病毒血凝素%凝胶阻滞试验%融合基因%表达与纯化
流感病毒血凝素%凝膠阻滯試驗%融閤基因%錶達與純化
류감병독혈응소%응효조체시험%융합기인%표체여순화
目的表达和纯化流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合蛋白HA20-lys10,并观察其与质粒结合的能力.方法用PCR方法构建流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合基因HA20-lys10,并克隆于pET32a(+)原核表达载体.将重组表达质粒pET-HA-K转化大肠埃希菌BL21(DE3),当A(Abs)600nm达到0.6时,加入终浓度为1 mmol/L IPIG诱导目的蛋白的表达.表达产物用亲和层析一步法进行纯化,然后用凝胶阻滞试验观察重组蛋白结合质粒的能力.结果IPTG诱导后可获得相对分子质量约为27 000的目的蛋白,表达蛋白以可溶形式存在,占菌体蛋白20%以上.表达菌超声后,表达产物经亲和层析一步纯化后可获得纯度达85%以上目的蛋白.凝胶阻滞试验发现,纯化的重组蛋白在一定条件下可以与质粒结合,使质粒的迁移率明显改变.结论融合蛋白HA20-lys10有望用于受体介导基因转移,以提高基因转移的效率.
目的錶達和純化流感病毒血凝素HA2氨基末耑20箇氨基痠與10箇賴氨痠的融閤蛋白HA20-lys10,併觀察其與質粒結閤的能力.方法用PCR方法構建流感病毒血凝素HA2氨基末耑20箇氨基痠與10箇賴氨痠的融閤基因HA20-lys10,併剋隆于pET32a(+)原覈錶達載體.將重組錶達質粒pET-HA-K轉化大腸埃希菌BL21(DE3),噹A(Abs)600nm達到0.6時,加入終濃度為1 mmol/L IPIG誘導目的蛋白的錶達.錶達產物用親和層析一步法進行純化,然後用凝膠阻滯試驗觀察重組蛋白結閤質粒的能力.結果IPTG誘導後可穫得相對分子質量約為27 000的目的蛋白,錶達蛋白以可溶形式存在,佔菌體蛋白20%以上.錶達菌超聲後,錶達產物經親和層析一步純化後可穫得純度達85%以上目的蛋白.凝膠阻滯試驗髮現,純化的重組蛋白在一定條件下可以與質粒結閤,使質粒的遷移率明顯改變.結論融閤蛋白HA20-lys10有望用于受體介導基因轉移,以提高基因轉移的效率.
목적표체화순화류감병독혈응소HA2안기말단20개안기산여10개뢰안산적융합단백HA20-lys10,병관찰기여질립결합적능력.방법용PCR방법구건류감병독혈응소HA2안기말단20개안기산여10개뢰안산적융합기인HA20-lys10,병극륭우pET32a(+)원핵표체재체.장중조표체질립pET-HA-K전화대장애희균BL21(DE3),당A(Abs)600nm체도0.6시,가입종농도위1 mmol/L IPIG유도목적단백적표체.표체산물용친화층석일보법진행순화,연후용응효조체시험관찰중조단백결합질립적능력.결과IPTG유도후가획득상대분자질량약위27 000적목적단백,표체단백이가용형식존재,점균체단백20%이상.표체균초성후,표체산물경친화층석일보순화후가획득순도체85%이상목적단백.응효조체시험발현,순화적중조단백재일정조건하가이여질립결합,사질립적천이솔명현개변.결론융합단백HA20-lys10유망용우수체개도기인전이,이제고기인전이적효솔.
