CAJ | 학술논문

目的纯化灭活SARS-CoV为研制马抗SARS-CoV免疫球蛋白提供抗原.方法将灭活的SARS-CoV悬液超滤浓缩,用Sepharose 4 Fast Flow分子筛和阴离子交换柱层析纯化,用高效液相色谱、SDS-PAGE和电镜观察测定抗原的纯度.结果将01、02和03三批SARS-CoV悬液分别进行11.2倍、12.5倍和25.0倍超滤浓缩,抗原的回收率依次为48.6%、46.3%和55.6%,凝胶过滤层析后抗原的回收率依次为81.6%、79.3%和86.0%.再经阴离子交换梯度层析进一步提高了抗原的纯度和浓度,蛋白的比活性由纯化前的0.11U/μg增加到1.44U/μg.电镜下观察到SARS-CoV抗原颗粒完整,呈圆形或椭圆形状,直径在80～120 nm之间.SDS-PAGE显示主要条带位于Mr43 000～66000之间,经质谱扫描分析确定该成分为Mr46 000.高效液相层析法分析抗原纯度为97.0%.马抗SARS-CoV免疫球蛋白中和抗体效价在1:6 400～1:12 800之间.结论本研究为制备高效价的马抗SARS-CoV免疫球蛋白奠定了基础.
목적순화멸활SARS-CoV위연제마항SARS-CoV면역구단백제공항원.방법장멸활적SARS-CoV현액초려농축,용Sepharose 4 Fast Flow분자사화음리자교환주층석순화,용고효액상색보、SDS-PAGE화전경관찰측정항원적순도.결과장01、02화03삼비SARS-CoV현액분별진행11.2배、12.5배화25.0배초려농축,항원적회수솔의차위48.6%、46.3%화55.6%,응효과려층석후항원적회수솔의차위81.6%、79.3%화86.0%.재경음리자교환제도층석진일보제고료항원적순도화농도,단백적비활성유순화전적0.11U/μg증가도1.44U/μg.전경하관찰도SARS-CoV항원과립완정,정원형혹타원형상,직경재80～120 nm지간.SDS-PAGE현시주요조대위우Mr43 000～66000지간,경질보소묘분석학정해성분위Mr46 000.고효액상층석법분석항원순도위97.0%.마항SARS-CoV면역구단백중화항체효개재1:6 400～1:12 800지간.결론본연구위제비고효개적마항SARS-CoV면역구단백전정료기출.