CAJ | 학술논문

目的构建含有人内皮抑素(endostatin,ES)基因的重组腺病毒Ad/hEnd,并探讨与感染该病毒的角朊细胞共培养时内皮细胞增殖特性的改变.方法以人胎肝组织mRNA为模板,通过RT-PCR及PCR获得ES基因序列,插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,获得重组质粒pAdTrack-ES.经鉴定后将阳性重组子转化至pAdeasy1受体菌,筛选阳性克隆.脂质体介导转染293细胞,获取Ad/hEnd,经PCR鉴定及上清中ES含量检测后,感染角朊细胞,并采用套皿法与内皮细胞共培养,测定培养液中ES含量、内皮细胞凋亡及细胞抑制率.结果成功获取Ad/hEnd,病毒滴度可达1.65×1012 pfu/L.感染Ad/hEnd的角朊细胞可有效表达并分泌ES,连续培养3 d后,培养液中ES含量可达226 ng/ml;与转基因角朊细胞共培养的内皮细胞凋亡百分数与抑制率分别为(32.7±7.1)%、(60.5±8.3)%,均显著高于对照组[(7.3±2.0)%、(13.8±1.6)%],(P＜0.01).结论与内皮细胞共培养时,转Ad/hEnd角朊细胞可通过分泌ES促进内皮细胞凋亡,并抑制其增殖.
목적구건함유인내피억소(endostatin,ES)기인적중조선병독Ad/hEnd,병탐토여감염해병독적각원세포공배양시내피세포증식특성적개변.방법이인태간조직mRNA위모판,통과RT-PCR급PCR획득ES기인서렬,삽입도선병독천사질립pAdTrack-CMV중,획득중조질립pAdTrack-ES.경감정후장양성중조자전화지pAdeasy1수체균,사선양성극륭.지질체개도전염293세포,획취Ad/hEnd,경PCR감정급상청중ES함량검측후,감염각원세포,병채용투명법여내피세포공배양,측정배양액중ES함량、내피세포조망급세포억제솔.결과성공획취Ad/hEnd,병독적도가체1.65×1012 pfu/L.감염Ad/hEnd적각원세포가유효표체병분비ES,련속배양3 d후,배양액중ES함량가체226 ng/ml;여전기인각원세포공배양적내피세포조망백분수여억제솔분별위(32.7±7.1)%、(60.5±8.3)%,균현저고우대조조[(7.3±2.0)%、(13.8±1.6)%],(P＜0.01).결론여내피세포공배양시,전Ad/hEnd각원세포가통과분비ES촉진내피세포조망,병억제기증식.