现代预防医学
現代預防醫學
현대예방의학
MODERN PREVENTIVE MEDICINE
2008年
10期
1894-1896,1899
,共4页
鞠小丽%邵世和%郝渭滨%董苏荣%崔蕾蕾
鞠小麗%邵世和%郝渭濱%董囌榮%崔蕾蕾
국소려%소세화%학위빈%동소영%최뢰뢰
幽门螺杆菌%外膜蛋白%基因表达%蛋白纯化
幽門螺桿菌%外膜蛋白%基因錶達%蛋白純化
유문라간균%외막단백%기인표체%단백순화
[目的]构建幽门螺杆菌(H. pylori) NCTC11637菌株36kDa (OMP36)外膜蛋白基因原核表达系统,探索研制H. pylori疫苗的新途径.[方法]培养和收集H. pylori NCTC11637菌株,提取基因组DNA, PCR扩增目的基因片断.将其克隆到T载体并测序,再将目的基因克隆入PET32a(+),构建重组表达载体PET32a-OMP36.转化E.coliBL21后IPTG诱导表达,经SDS-PAGE鉴定、镍亲和层析纯化、Western blot检测表达蛋白.(结果)测序分析表明,插入的基因片断为987bp,表达的蛋白的相对分子质量(Mr)约为36kDa,并显示具有良好的抗原性.SDS-PAGE检测表明,表达量占细菌总蛋白的37%,镍亲和层析纯化率约92%.Western blot检测表达蛋白具有良好的抗原活性.[结论]成功克隆了外膜蛋白OMP 36kDa的编码基因,其表达产物OMP 36有望成为新的Hp疫苗候选分子,为H. pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础.
[目的]構建幽門螺桿菌(H. pylori) NCTC11637菌株36kDa (OMP36)外膜蛋白基因原覈錶達繫統,探索研製H. pylori疫苗的新途徑.[方法]培養和收集H. pylori NCTC11637菌株,提取基因組DNA, PCR擴增目的基因片斷.將其剋隆到T載體併測序,再將目的基因剋隆入PET32a(+),構建重組錶達載體PET32a-OMP36.轉化E.coliBL21後IPTG誘導錶達,經SDS-PAGE鑒定、鎳親和層析純化、Western blot檢測錶達蛋白.(結果)測序分析錶明,插入的基因片斷為987bp,錶達的蛋白的相對分子質量(Mr)約為36kDa,併顯示具有良好的抗原性.SDS-PAGE檢測錶明,錶達量佔細菌總蛋白的37%,鎳親和層析純化率約92%.Western blot檢測錶達蛋白具有良好的抗原活性.[結論]成功剋隆瞭外膜蛋白OMP 36kDa的編碼基因,其錶達產物OMP 36有望成為新的Hp疫苗候選分子,為H. pylori疫苗的研製和試劑盒的開髮奠定瞭良好的基礎.
[목적]구건유문라간균(H. pylori) NCTC11637균주36kDa (OMP36)외막단백기인원핵표체계통,탐색연제H. pylori역묘적신도경.[방법]배양화수집H. pylori NCTC11637균주,제취기인조DNA, PCR확증목적기인편단.장기극륭도T재체병측서,재장목적기인극륭입PET32a(+),구건중조표체재체PET32a-OMP36.전화E.coliBL21후IPTG유도표체,경SDS-PAGE감정、얼친화층석순화、Western blot검측표체단백.(결과)측서분석표명,삽입적기인편단위987bp,표체적단백적상대분자질량(Mr)약위36kDa,병현시구유량호적항원성.SDS-PAGE검측표명,표체량점세균총단백적37%,얼친화층석순화솔약92%.Western blot검측표체단백구유량호적항원활성.[결론]성공극륭료외막단백OMP 36kDa적편마기인,기표체산물OMP 36유망성위신적Hp역묘후선분자,위H. pylori역묘적연제화시제합적개발전정료량호적기출.
