重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2011年
9期
1073-1076
,共4页
张璐%方宇%曾昭书%连亚军%许予明
張璐%方宇%曾昭書%連亞軍%許予明
장로%방우%증소서%련아군%허여명
人APE1%慢病毒载体%基因治疗
人APE1%慢病毒載體%基因治療
인APE1%만병독재체%기인치료
目的:构建携带人脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶-1 (Apurinic/apyrimidinic endonuclease-1,APE1)基因重组慢病毒载体内英文摘要中,并检测其体外表达目的基因的水平.方法:应用基因克隆技术将人APE1基因克隆入慢病毒载体LV中,经过PCR、酶切和测序鉴定后,与包装四质粒系统共转染293T细胞,制备并收集携带APE1基因的慢病毒,重组慢病毒感染体外培养大鼠神经元细胞,利用实时定量PCR、蛋白质免疫印迹方法检测APE1的表达情况,观察病毒转染效果.结果:PCR、酶切和测序鉴定,成功克隆了LV-APE1重组质粒.包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为1.0× 109 TU/ml.慢病毒颗粒稳定转染大鼠神经元细胞,当感染复数为50时,感染效率100％,实时定量PCR、蛋白质免疫印迹方法可以检测到重组慢病毒感染大鼠神经元细胞后能高水平表达APE1.结论:成功构建了携带人APE1基因慢病毒载体,并可在体外高水平表达其所携带的目的基因,为将其进一步应用于神经系统退行性疾病的治疗研究奠定了方法学基础.
目的:構建攜帶人脫嘌呤/脫嘧啶覈痠內切酶-1 (Apurinic/apyrimidinic endonuclease-1,APE1)基因重組慢病毒載體內英文摘要中,併檢測其體外錶達目的基因的水平.方法:應用基因剋隆技術將人APE1基因剋隆入慢病毒載體LV中,經過PCR、酶切和測序鑒定後,與包裝四質粒繫統共轉染293T細胞,製備併收集攜帶APE1基因的慢病毒,重組慢病毒感染體外培養大鼠神經元細胞,利用實時定量PCR、蛋白質免疫印跡方法檢測APE1的錶達情況,觀察病毒轉染效果.結果:PCR、酶切和測序鑒定,成功剋隆瞭LV-APE1重組質粒.包裝慢病毒,濃縮病毒懸液的滴度為1.0× 109 TU/ml.慢病毒顆粒穩定轉染大鼠神經元細胞,噹感染複數為50時,感染效率100％,實時定量PCR、蛋白質免疫印跡方法可以檢測到重組慢病毒感染大鼠神經元細胞後能高水平錶達APE1.結論:成功構建瞭攜帶人APE1基因慢病毒載體,併可在體外高水平錶達其所攜帶的目的基因,為將其進一步應用于神經繫統退行性疾病的治療研究奠定瞭方法學基礎.
목적:구건휴대인탈표령/탈밀정핵산내절매-1 (Apurinic/apyrimidinic endonuclease-1,APE1)기인중조만병독재체내영문적요중,병검측기체외표체목적기인적수평.방법:응용기인극륭기술장인APE1기인극륭입만병독재체LV중,경과PCR、매절화측서감정후,여포장사질립계통공전염293T세포,제비병수집휴대APE1기인적만병독,중조만병독감염체외배양대서신경원세포,이용실시정량PCR、단백질면역인적방법검측APE1적표체정황,관찰병독전염효과.결과:PCR、매절화측서감정,성공극륭료LV-APE1중조질립.포장만병독,농축병독현액적적도위1.0× 109 TU/ml.만병독과립은정전염대서신경원세포,당감염복수위50시,감염효솔100％,실시정량PCR、단백질면역인적방법가이검측도중조만병독감염대서신경원세포후능고수평표체APE1.결론:성공구건료휴대인APE1기인만병독재체,병가재체외고수평표체기소휴대적목적기인,위장기진일보응용우신경계통퇴행성질병적치료연구전정료방법학기출.
