CAJ | 학술논문

为研究垂体特异性转录因子(Pituitary transcription factor 1,PIT-1)启动子的转录调控机制,寻找该基因转录调控的顺式作用元件、反式作用因子和基本转录单位.利用前期染色体步移技术扩增得到鹅PIT-1基因的启动子区序列,经PCR扩增,定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic中,把目的片段连接到荧光素酶报告基因载体(pGL-Basic),制备了一系列启动子缺失体(-1 485/-1 bp、-1 293/-1 bp、-1 014/-1 bp、-775/-1 bp、-561/-1 bp、-353/-1 bp和-206/-1 bp),并通过限性内切酶酶切、PCR及测序进行鉴定,构建了含有正确目的基因的报告基因重组体,然后瞬时转染GH3细胞,利用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测.本试验所克隆的PIT-1基因启动子区具有明显的启动子活性,其中-561/-1 bp的启动活性最强,该区域存在有PIT-1、POU3F2、myogenin和GR等多个转录因子结合位点.利用系列缺失法成功构建了荧光素酶报告基因真核表达载体,并且验证了克隆的启动子具有启动活性,找到了正负调控区域及核心启动子区,为进一步研究其转录调控机制奠定了基础.
위연구수체특이성전록인자(Pituitary transcription factor 1,PIT-1)계동자적전록조공궤제,심조해기인전록조공적순식작용원건、반식작용인자화기본전록단위.이용전기염색체보이기술확증득도아PIT-1기인적계동자구서렬,경PCR확증,정향아극륭지형광소매표체재체pGL3-Basic중,파목적편단련접도형광소매보고기인재체(pGL-Basic),제비료일계렬계동자결실체(-1 485/-1 bp、-1 293/-1 bp、-1 014/-1 bp、-775/-1 bp、-561/-1 bp、-353/-1 bp화-206/-1 bp),병통과한성내절매매절、PCR급측서진행감정,구건료함유정학목적기인적보고기인중조체,연후순시전염GH3세포,이용형광소매보고기인검측시제합검측.본시험소극륭적PIT-1기인계동자구구유명현적계동자활성,기중-561/-1 bp적계동활성최강,해구역존재유PIT-1、POU3F2、myogenin화GR등다개전록인자결합위점.이용계렬결실법성공구건료형광소매보고기인진핵표체재체,병차험증료극륭적계동자구유계동활성,조도료정부조공구역급핵심계동자구,위진일보연구기전록조공궤제전정료기출.