微生物与感染
微生物與感染
미생물여감염
JOURNAL OF MICROBES AND INFECTION
2012年
1期
28-36
,共9页
赵文然%钟学宽%张淑娟%沃晓嫚%张中海%王博%钟照华
趙文然%鐘學寬%張淑娟%沃曉嫚%張中海%王博%鐘照華
조문연%종학관%장숙연%옥효만%장중해%왕박%종조화
柯萨奇病毒B组3型%红色荧光蛋白%mCherry%基因重组
柯薩奇病毒B組3型%紅色熒光蛋白%mCherry%基因重組
가살기병독B조3형%홍색형광단백%mCherry%기인중조
本文旨在分析含红色荧光蛋白mCherry基因的重组柯萨奇病毒B组3型(CVB3)基因组的稳定性.用重组质粒pCVB3-mCherry转染HeLa细胞,观察细胞病变和mCherry的表达.收获病毒后,用噬斑形成实验纯化病毒并测定病毒毒力.将重组病毒CVB3-mCherry在HeLa细胞中连续传代,提取第2～6代重组病毒总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出报告基因mCherry及CVB3部分序列,进行测序分析.结果表明,pCVB3-mCherry转染的HeLa细胞出现细胞病变并表达红色荧光蛋白mCherry;从第2代开始,CVB3-mCherry出现报告基因mCherry及部分CVB VP4基因序列丢失,基因序列丢失导致病毒开放读码框架移位.本研究表明,mCherry基因序列的插入导致CVB3基因组不稳定.随着病毒的传代逐渐丢失插入的报告基因mCherry及CVB3基因组的部分序列,病毒读码框架移位,产生致死性突变株.因此,应用CVB3-mCherry时,病毒的传代次数不超过2代,否则应重新从重组质粒中收获病毒,并对每代重组病毒进行纯化和毒力测定.
本文旨在分析含紅色熒光蛋白mCherry基因的重組柯薩奇病毒B組3型(CVB3)基因組的穩定性.用重組質粒pCVB3-mCherry轉染HeLa細胞,觀察細胞病變和mCherry的錶達.收穫病毒後,用噬斑形成實驗純化病毒併測定病毒毒力.將重組病毒CVB3-mCherry在HeLa細胞中連續傳代,提取第2～6代重組病毒總RNA,經反轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)擴增齣報告基因mCherry及CVB3部分序列,進行測序分析.結果錶明,pCVB3-mCherry轉染的HeLa細胞齣現細胞病變併錶達紅色熒光蛋白mCherry;從第2代開始,CVB3-mCherry齣現報告基因mCherry及部分CVB VP4基因序列丟失,基因序列丟失導緻病毒開放讀碼框架移位.本研究錶明,mCherry基因序列的插入導緻CVB3基因組不穩定.隨著病毒的傳代逐漸丟失插入的報告基因mCherry及CVB3基因組的部分序列,病毒讀碼框架移位,產生緻死性突變株.因此,應用CVB3-mCherry時,病毒的傳代次數不超過2代,否則應重新從重組質粒中收穫病毒,併對每代重組病毒進行純化和毒力測定.
본문지재분석함홍색형광단백mCherry기인적중조가살기병독B조3형(CVB3)기인조적은정성.용중조질립pCVB3-mCherry전염HeLa세포,관찰세포병변화mCherry적표체.수획병독후,용서반형성실험순화병독병측정병독독력.장중조병독CVB3-mCherry재HeLa세포중련속전대,제취제2～6대중조병독총RNA,경반전록-취합매련반응(RT-PCR)확증출보고기인mCherry급CVB3부분서렬,진행측서분석.결과표명,pCVB3-mCherry전염적HeLa세포출현세포병변병표체홍색형광단백mCherry;종제2대개시,CVB3-mCherry출현보고기인mCherry급부분CVB VP4기인서렬주실,기인서렬주실도치병독개방독마광가이위.본연구표명,mCherry기인서렬적삽입도치CVB3기인조불은정.수착병독적전대축점주실삽입적보고기인mCherry급CVB3기인조적부분서렬,병독독마광가이위,산생치사성돌변주.인차,응용CVB3-mCherry시,병독적전대차수불초과2대,부칙응중신종중조질립중수획병독,병대매대중조병독진행순화화독력측정.
