生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2012年
2期
183-185
,共3页
脆性组氨酸三联体%突变体%稳定表达细胞系
脆性組氨痠三聯體%突變體%穩定錶達細胞繫
취성조안산삼련체%돌변체%은정표체세포계
目的:构建人脆性组氨酸三联体(Fhit)突变体真核表达载体并建立稳定表达人Fhit突变体的细胞株,以便进一步研究Fhit与复制蛋白A(RPA)在体内的相互作用.方法:将3种人Fhit突变体cDNA克隆至带有HA标签的真核表达载体pREP10上,构建人Fhit突变体真核表达载体,转染HeLa细胞,经湖霉素B加压筛选阳性克隆,用Western印迹鉴定稳定表达Fhit突变体蛋白FhitA、FhitD和FhitF的阳性细胞株.结果:经PCR鉴定及序列分析,Fhit突变体基因真核表达载体pREP10/FhitA/D/F-HA构建正确,转染人HeLa细胞,筛选出Fhit突变体表达较高的细胞株.结论:建立了3株稳定表达Fhit突变体的细胞株HeLa-FhitA/D/F,为研究Fhit与RPA的相互作用在DNA损伤应答中发挥的作用奠定了基础.
目的:構建人脆性組氨痠三聯體(Fhit)突變體真覈錶達載體併建立穩定錶達人Fhit突變體的細胞株,以便進一步研究Fhit與複製蛋白A(RPA)在體內的相互作用.方法:將3種人Fhit突變體cDNA剋隆至帶有HA標籤的真覈錶達載體pREP10上,構建人Fhit突變體真覈錶達載體,轉染HeLa細胞,經湖黴素B加壓篩選暘性剋隆,用Western印跡鑒定穩定錶達Fhit突變體蛋白FhitA、FhitD和FhitF的暘性細胞株.結果:經PCR鑒定及序列分析,Fhit突變體基因真覈錶達載體pREP10/FhitA/D/F-HA構建正確,轉染人HeLa細胞,篩選齣Fhit突變體錶達較高的細胞株.結論:建立瞭3株穩定錶達Fhit突變體的細胞株HeLa-FhitA/D/F,為研究Fhit與RPA的相互作用在DNA損傷應答中髮揮的作用奠定瞭基礎.
목적:구건인취성조안산삼련체(Fhit)돌변체진핵표체재체병건립은정표체인Fhit돌변체적세포주,이편진일보연구Fhit여복제단백A(RPA)재체내적상호작용.방법:장3충인Fhit돌변체cDNA극륭지대유HA표첨적진핵표체재체pREP10상,구건인Fhit돌변체진핵표체재체,전염HeLa세포,경호매소B가압사선양성극륭,용Western인적감정은정표체Fhit돌변체단백FhitA、FhitD화FhitF적양성세포주.결과:경PCR감정급서렬분석,Fhit돌변체기인진핵표체재체pREP10/FhitA/D/F-HA구건정학,전염인HeLa세포,사선출Fhit돌변체표체교고적세포주.결론:건립료3주은정표체Fhit돌변체적세포주HeLa-FhitA/D/F,위연구Fhit여RPA적상호작용재DNA손상응답중발휘적작용전정료기출.
