四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2009年
1期
1-5
,共5页
蒋磊%覃扬%孙芝琳%武静%杨文理%张军哲
蔣磊%覃颺%孫芝琳%武靜%楊文理%張軍哲
장뢰%담양%손지림%무정%양문리%장군철
CTCF结合因子%融合蛋白%表达
CTCF結閤因子%融閤蛋白%錶達
CTCF결합인자%융합단백%표체
目的 构建人CTCF cDNA全长及N端、Zn指、C端3个片段的原核融合表达载体,纯化融合蛋白并进行鉴定.方法 以编码CTCF全长序列的质粒为PCR模板,分别构建GST融合表达重组质粒pGEX-4T-2-CTCF,pGEX-4T-2-CTCF-N,pGEX-4T-2-CTCF-Zn,pGEX-4T-2-CTCF-C,转化大肠杆菌BL21,酶切、测序鉴定;优化IPTG诱导表达条件,并对亲和层析纯化的GST融合蛋白CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF进行Far-West-ern blot鉴定.结果 重组质粒经双酶切和测序鉴定证实构建成功.GST融合蛋白CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C均在大肠杆菌中成功诱导表达,融合蛋白经亲和层析纯化获得纯化蛋白.各纯化蛋白经SDS-PAGE和Far-Western blot鉴定,均为诱导表达蛋白质.结论 成功构建了GST融合表达CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C的重组质粒,对融合蛋白表达条件进行了优化.获得了高效表达的GST融合蛋白.
目的 構建人CTCF cDNA全長及N耑、Zn指、C耑3箇片段的原覈融閤錶達載體,純化融閤蛋白併進行鑒定.方法 以編碼CTCF全長序列的質粒為PCR模闆,分彆構建GST融閤錶達重組質粒pGEX-4T-2-CTCF,pGEX-4T-2-CTCF-N,pGEX-4T-2-CTCF-Zn,pGEX-4T-2-CTCF-C,轉化大腸桿菌BL21,酶切、測序鑒定;優化IPTG誘導錶達條件,併對親和層析純化的GST融閤蛋白CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF進行Far-West-ern blot鑒定.結果 重組質粒經雙酶切和測序鑒定證實構建成功.GST融閤蛋白CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C均在大腸桿菌中成功誘導錶達,融閤蛋白經親和層析純化穫得純化蛋白.各純化蛋白經SDS-PAGE和Far-Western blot鑒定,均為誘導錶達蛋白質.結論 成功構建瞭GST融閤錶達CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C的重組質粒,對融閤蛋白錶達條件進行瞭優化.穫得瞭高效錶達的GST融閤蛋白.
목적 구건인CTCF cDNA전장급N단、Zn지、C단3개편단적원핵융합표체재체,순화융합단백병진행감정.방법 이편마CTCF전장서렬적질립위PCR모판,분별구건GST융합표체중조질립pGEX-4T-2-CTCF,pGEX-4T-2-CTCF-N,pGEX-4T-2-CTCF-Zn,pGEX-4T-2-CTCF-C,전화대장간균BL21,매절、측서감정;우화IPTG유도표체조건,병대친화층석순화적GST융합단백CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF진행Far-West-ern blot감정.결과 중조질립경쌍매절화측서감정증실구건성공.GST융합단백CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C균재대장간균중성공유도표체,융합단백경친화층석순화획득순화단백.각순화단백경SDS-PAGE화Far-Western blot감정,균위유도표체단백질.결론 성공구건료GST융합표체CTCF,CTCF-N,CTCF-Zn,CTCF-C적중조질립,대융합단백표체조건진행료우화.획득료고효표체적GST융합단백.
