CAJ | 학술논문

背景:研究表明,可溶性血管内皮生长因子受体Flt-1(sflt-1)基因在多种组织中表达,但其在内皮细胞中的表达尚待证实.目的:获取人sflt-1基因,构建sflt-l基因真核表达载体pEGFP-N1/sflt-1重组质粒,检测其在人脐静脉内皮细胞中的表达.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-05/12在南昌大学第二附属医院分子中心完成.材料:pEGFP-N1真核表达载体为南昌大学第二附属医院分子中心保存,人脐静脉内皮细胞株购至南京基凯生物技术公司.方法:从含有目的基因的质粒克隆模板中,利用酶切的方法获得目的基因,将目的载体进行酶切,纯化酶切产物后进行定向连接,其产物转化细菌感受态细胞,PCR鉴定为阳性的克隆,证明目的基因已经定向连入目的载体.再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和分析比对,比对正确的即为构建成功的融合蛋白表达质粒载体.用脂质体法将pEGFP-N1/sflt-1重组质粒转染人脐静脉内皮细胞.主要观察指标:①重组质粒的酶切鉴定结果.②重组质粒的测序鉴定结果.⑧荧光显微镜及蛋白免疫印迹检测sflt-1基因在人脐静脉内皮细胞中的表达.结果:①对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和分析比对,与sflt-1基因片段全长2 063 bp理论值相符,证实pEGFP-N1/sflt-1重组质粒构建成功.②重组质粒送至上海捷瑞生物技术公司进行通测,测序结果证实插入片段序列与理论值完全一致.③荧光显微镜下可见重组质粒转染人脐静脉内皮细胞发绿色荧光,蛋白免疫印迹检测表明sflt-1基因能在人脐静脉内皮细胞中表达.结论:实验成功构建了携带人血管内皮生长因子受体Flt-1的重组pEGFP-N1/sflt-1真核表达质粒,并证实其在人脐静脉内皮细胞中的表达.
배경:연구표명,가용성혈관내피생장인자수체Flt-1(sflt-1)기인재다충조직중표체,단기재내피세포중적표체상대증실.목적:획취인sflt-1기인,구건sflt-l기인진핵표체재체pEGFP-N1/sflt-1중조질립,검측기재인제정맥내피세포중적표체.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2008-05/12재남창대학제이부속의원분자중심완성.재료:pEGFP-N1진핵표체재체위남창대학제이부속의원분자중심보존,인제정맥내피세포주구지남경기개생물기술공사.방법:종함유목적기인적질립극륭모판중,이용매절적방법획득목적기인,장목적재체진행매절,순화매절산물후진행정향련접,기산물전화세균감수태세포,PCR감정위양성적극륭,증명목적기인이경정향련입목적재체.재대PCR감정양성적극륭진행측서화분석비대,비대정학적즉위구건성공적융합단백표체질립재체.용지질체법장pEGFP-N1/sflt-1중조질립전염인제정맥내피세포.주요관찰지표:①중조질립적매절감정결과.②중조질립적측서감정결과.⑧형광현미경급단백면역인적검측sflt-1기인재인제정맥내피세포중적표체.결과:①대PCR감정양성적극륭진행측서화분석비대,여sflt-1기인편단전장2 063 bp이론치상부,증실pEGFP-N1/sflt-1중조질립구건성공.②중조질립송지상해첩서생물기술공사진행통측,측서결과증실삽입편단서렬여이론치완전일치.③형광현미경하가견중조질립전염인제정맥내피세포발록색형광,단백면역인적검측표명sflt-1기인능재인제정맥내피세포중표체.결론:실험성공구건료휴대인혈관내피생장인자수체Flt-1적중조pEGFP-N1/sflt-1진핵표체질립,병증실기재인제정맥내피세포중적표체.