农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2010年
4期
654-662
,共9页
李汉霞%张晓辉%付雪林%张余洋%张俊红%王涛涛%叶志彪
李漢霞%張曉輝%付雪林%張餘洋%張俊紅%王濤濤%葉誌彪
리한하%장효휘%부설림%장여양%장준홍%왕도도%협지표
双价转基因%Cry1Ac%Cry1C%抗虫性%青花菜
雙價轉基因%Cry1Ac%Cry1C%抗蟲性%青花菜
쌍개전기인%Cry1Ac%Cry1C%항충성%청화채
以青花菜(Brassica oleracea L.ssp.italica)下胚轴为外植体,通过农杆菌介导的遗传转化方法将苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)晶体毒蛋白基因Cry1Ac和Cry1C分别导入青花菜栽培品种绿彗星中,各获得35株卡那霉素抗性植株.分别以Cry1Ac和Cry1C特异引物对转基因植株进行PCR扩增,结果得到27株Cry1Ac阳性植株和13株Cry1C阳性植株.以目的基因Cry1Ac和Cry1C为探针,进行Southern blot分析,证明多数植株目的基因已经整合到青花菜基因组中.对含有单拷贝目的基因植株自交纯合后通过有性杂交获得带有Cry1Ac和Cry1C双价的转基因青花菜.利用RT-PCR检测Bt基因在转基因植株中的表达情况,发现不同株系间在RNA水平上存在显著的表达差异,部分株系中双价Bt同时得到表达.ELISA检测转基因植株Bt毒蛋白含量为0.12～0.82 μg/gFW.结合室内和田间饲虫试验,证明抗虫效果与Bt毒蛋白表达水平正相关.通过多世代选择,获得高抗菜粉蝶(Pieris rapae L.)和小菜蛾(Plutella xylostella L.)的纯合转基因青花菜材料.双价抗虫基因共同作用,提高了青花菜的抗虫性.
以青花菜(Brassica oleracea L.ssp.italica)下胚軸為外植體,通過農桿菌介導的遺傳轉化方法將囌雲金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis)晶體毒蛋白基因Cry1Ac和Cry1C分彆導入青花菜栽培品種綠彗星中,各穫得35株卡那黴素抗性植株.分彆以Cry1Ac和Cry1C特異引物對轉基因植株進行PCR擴增,結果得到27株Cry1Ac暘性植株和13株Cry1C暘性植株.以目的基因Cry1Ac和Cry1C為探針,進行Southern blot分析,證明多數植株目的基因已經整閤到青花菜基因組中.對含有單拷貝目的基因植株自交純閤後通過有性雜交穫得帶有Cry1Ac和Cry1C雙價的轉基因青花菜.利用RT-PCR檢測Bt基因在轉基因植株中的錶達情況,髮現不同株繫間在RNA水平上存在顯著的錶達差異,部分株繫中雙價Bt同時得到錶達.ELISA檢測轉基因植株Bt毒蛋白含量為0.12～0.82 μg/gFW.結閤室內和田間飼蟲試驗,證明抗蟲效果與Bt毒蛋白錶達水平正相關.通過多世代選擇,穫得高抗菜粉蝶(Pieris rapae L.)和小菜蛾(Plutella xylostella L.)的純閤轉基因青花菜材料.雙價抗蟲基因共同作用,提高瞭青花菜的抗蟲性.
이청화채(Brassica oleracea L.ssp.italica)하배축위외식체,통과농간균개도적유전전화방법장소운금아포간균(Bacillus thuringiensis)정체독단백기인Cry1Ac화Cry1C분별도입청화채재배품충록혜성중,각획득35주잡나매소항성식주.분별이Cry1Ac화Cry1C특이인물대전기인식주진행PCR확증,결과득도27주Cry1Ac양성식주화13주Cry1C양성식주.이목적기인Cry1Ac화Cry1C위탐침,진행Southern blot분석,증명다수식주목적기인이경정합도청화채기인조중.대함유단고패목적기인식주자교순합후통과유성잡교획득대유Cry1Ac화Cry1C쌍개적전기인청화채.이용RT-PCR검측Bt기인재전기인식주중적표체정황,발현불동주계간재RNA수평상존재현저적표체차이,부분주계중쌍개Bt동시득도표체.ELISA검측전기인식주Bt독단백함량위0.12～0.82 μg/gFW.결합실내화전간사충시험,증명항충효과여Bt독단백표체수평정상관.통과다세대선택,획득고항채분접(Pieris rapae L.)화소채아(Plutella xylostella L.)적순합전기인청화채재료.쌍개항충기인공동작용,제고료청화채적항충성.
