中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2011年
11期
1913-1917
,共5页
高忠平%秦丽%张越%耿倩倩%孙奋勇
高忠平%秦麗%張越%耿倩倩%孫奮勇
고충평%진려%장월%경천천%손강용
成骨%染色质重塑%Brg1%Dlx5%骨形态发生蛋白2
成骨%染色質重塑%Brg1%Dlx5%骨形態髮生蛋白2
성골%염색질중소%Brg1%Dlx5%골형태발생단백2
背景:Brg1是依赖ATP的染色质改变复合物的核心催化亚基,该亚基在基因的转录调控、复制、重组,骨骼肌的分化、抑制肿瘤的发生等活动中起着重要的作用.目的:探索Brg1基因在骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞分化过程中的调控机制.方法:采用胶原酶消化法进行小鼠颅骨成骨细胞的原代培养;分别用0,50,200 μg/L的重组人骨形态发生蛋白2诱导原代培养的成骨细胞的分化,摸索骨形态发生蛋白2的最佳作用剂量;实时荧光定量PCR和Western blot进行骨形态发生蛋白2对Brg1的作用时间的动力学分析;实时荧光定量PCR和钙钴染色法检测敲除Brg1对骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化的影响;构建Dlx5腺病毒重组表达载体,实时荧光定量PCR和钙钴染色法检测Brg1在骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化过程中对Dlx5的调控作用.结果与结论:用自行合成的重组人骨形态发生蛋白2可诱导原代培养小鼠成骨细胞分化,200 μg/L剂量有着较好的诱导分化效果;重组人骨形态发生蛋白2可诱导Brg1基因转录水平和翻译水平表达水平上调;敲除Brg1可抑制重组人骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化;Brg1能够调控Dlx5的表达水平.说明Brg1通过调控Dlx5的表达水平调控重组人骨形态发生蛋白2诱导的小鼠成骨细胞的分化.
揹景:Brg1是依賴ATP的染色質改變複閤物的覈心催化亞基,該亞基在基因的轉錄調控、複製、重組,骨骼肌的分化、抑製腫瘤的髮生等活動中起著重要的作用.目的:探索Brg1基因在骨形態髮生蛋白2誘導成骨細胞分化過程中的調控機製.方法:採用膠原酶消化法進行小鼠顱骨成骨細胞的原代培養;分彆用0,50,200 μg/L的重組人骨形態髮生蛋白2誘導原代培養的成骨細胞的分化,摸索骨形態髮生蛋白2的最佳作用劑量;實時熒光定量PCR和Western blot進行骨形態髮生蛋白2對Brg1的作用時間的動力學分析;實時熒光定量PCR和鈣鈷染色法檢測敲除Brg1對骨形態髮生蛋白2誘導的成骨分化的影響;構建Dlx5腺病毒重組錶達載體,實時熒光定量PCR和鈣鈷染色法檢測Brg1在骨形態髮生蛋白2誘導的成骨分化過程中對Dlx5的調控作用.結果與結論:用自行閤成的重組人骨形態髮生蛋白2可誘導原代培養小鼠成骨細胞分化,200 μg/L劑量有著較好的誘導分化效果;重組人骨形態髮生蛋白2可誘導Brg1基因轉錄水平和翻譯水平錶達水平上調;敲除Brg1可抑製重組人骨形態髮生蛋白2誘導的成骨分化;Brg1能夠調控Dlx5的錶達水平.說明Brg1通過調控Dlx5的錶達水平調控重組人骨形態髮生蛋白2誘導的小鼠成骨細胞的分化.
배경:Brg1시의뢰ATP적염색질개변복합물적핵심최화아기,해아기재기인적전록조공、복제、중조,골격기적분화、억제종류적발생등활동중기착중요적작용.목적:탐색Brg1기인재골형태발생단백2유도성골세포분화과정중적조공궤제.방법:채용효원매소화법진행소서로골성골세포적원대배양;분별용0,50,200 μg/L적중조인골형태발생단백2유도원대배양적성골세포적분화,모색골형태발생단백2적최가작용제량;실시형광정량PCR화Western blot진행골형태발생단백2대Brg1적작용시간적동역학분석;실시형광정량PCR화개고염색법검측고제Brg1대골형태발생단백2유도적성골분화적영향;구건Dlx5선병독중조표체재체,실시형광정량PCR화개고염색법검측Brg1재골형태발생단백2유도적성골분화과정중대Dlx5적조공작용.결과여결론:용자행합성적중조인골형태발생단백2가유도원대배양소서성골세포분화,200 μg/L제량유착교호적유도분화효과;중조인골형태발생단백2가유도Brg1기인전록수평화번역수평표체수평상조;고제Brg1가억제중조인골형태발생단백2유도적성골분화;Brg1능구조공Dlx5적표체수평.설명Brg1통과조공Dlx5적표체수평조공중조인골형태발생단백2유도적소서성골세포적분화.
