军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2006年
2期
140-143,146
,共5页
阎新龙%林艳丽%刘珠果%吴晓洁%周艳荣%温叶飞%陈红星%邓继先
閻新龍%林豔麗%劉珠果%吳曉潔%週豔榮%溫葉飛%陳紅星%鄧繼先
염신룡%림염려%류주과%오효길%주염영%온협비%진홍성%산계선
猪%体细胞核移植%电融合%化学激活%胚胎培养
豬%體細胞覈移植%電融閤%化學激活%胚胎培養
저%체세포핵이식%전융합%화학격활%배태배양
目的:摸索猪体细胞核移植最佳的融合和激活条件.方法:利用体外成熟的去核猪卵母细胞为受体,颗粒细胞为供核细胞,透明带间隙注射法构建重构胚,对电融合和激活的参数(电场强度、脉冲宽度、脉冲次数、融合液中Ca2+浓度、联合激活参数)进行摸索.结果:发现在电场强度1.5 kV/cm,脉冲宽度30 μs,2次脉冲(间隔3 s),电融合液中0.1 mmol/L的Ca2+浓度下进行电激活,进而用(CB,7.5 μg/ml)+(6-DMAP,2 mmol/L)激活3.5 h发育率最高,48 h卵裂率为72.5%,第6天桑葚胚率为35.1%;初次尝试了在胚胎培养前48 h加入0.05 mol/L的甘露醇来增加渗透压以减少电激活后重构胚的碎片化程度,但发现卵裂率及桑葚胚发育率与对照组差异不显著.结论:初步得到了适宜的猪体细胞核移植的融合和激活条件,为随后克隆胚早期发育基因的研究打下了基础.
目的:摸索豬體細胞覈移植最佳的融閤和激活條件.方法:利用體外成熟的去覈豬卵母細胞為受體,顆粒細胞為供覈細胞,透明帶間隙註射法構建重構胚,對電融閤和激活的參數(電場彊度、脈遲寬度、脈遲次數、融閤液中Ca2+濃度、聯閤激活參數)進行摸索.結果:髮現在電場彊度1.5 kV/cm,脈遲寬度30 μs,2次脈遲(間隔3 s),電融閤液中0.1 mmol/L的Ca2+濃度下進行電激活,進而用(CB,7.5 μg/ml)+(6-DMAP,2 mmol/L)激活3.5 h髮育率最高,48 h卵裂率為72.5%,第6天桑葚胚率為35.1%;初次嘗試瞭在胚胎培養前48 h加入0.05 mol/L的甘露醇來增加滲透壓以減少電激活後重構胚的碎片化程度,但髮現卵裂率及桑葚胚髮育率與對照組差異不顯著.結論:初步得到瞭適宜的豬體細胞覈移植的融閤和激活條件,為隨後剋隆胚早期髮育基因的研究打下瞭基礎.
목적:모색저체세포핵이식최가적융합화격활조건.방법:이용체외성숙적거핵저란모세포위수체,과립세포위공핵세포,투명대간극주사법구건중구배,대전융합화격활적삼수(전장강도、맥충관도、맥충차수、융합액중Ca2+농도、연합격활삼수)진행모색.결과:발현재전장강도1.5 kV/cm,맥충관도30 μs,2차맥충(간격3 s),전융합액중0.1 mmol/L적Ca2+농도하진행전격활,진이용(CB,7.5 μg/ml)+(6-DMAP,2 mmol/L)격활3.5 h발육솔최고,48 h란렬솔위72.5%,제6천상심배솔위35.1%;초차상시료재배태배양전48 h가입0.05 mol/L적감로순래증가삼투압이감소전격활후중구배적쇄편화정도,단발현란렬솔급상심배발육솔여대조조차이불현저.결론:초보득도료괄의적저체세포핵이식적융합화격활조건,위수후극륭배조기발육기인적연구타하료기출.
