中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2007年
12期
1238-1242
,共5页
张书环%吴波%曹莎%陈颖钰%晁彦杰%陈焕春%郭爱珍
張書環%吳波%曹莎%陳穎鈺%晁彥傑%陳煥春%郭愛珍
장서배%오파%조사%진영옥%조언걸%진환춘%곽애진
牛分枝杆菌%结核%融合表达
牛分枝桿菌%結覈%融閤錶達
우분지간균%결핵%융합표체
目的 牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83、CFP-10和ESAT-6的融合表达及相关特性分析.方法 应用PCR方法从牛分枝杆菌临床分离株基因组中扩增获得mpb70、mpb83、cfp-10和esat-6四个目的基因片段.采用重叠延伸剪接技术(splicing by overlap extension,SOE)获得融合基因cfp10-esat6和mpb83-cfp10-esat6,将mpb70和mpb83-cfp10-esat6串连于载体pUC19-Linker上,再将mpb70-mpb83-cfp10-esat6连于表达载体pET28a(+)中得到重组质粒pET70-83-C10-E6.转化BL21(DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导获得以可溶形式表达的融合蛋白.用Ni2+亲合层析法纯化该融合蛋白.结果 经ELISA验证该融合蛋白能分别与抗原蛋白MPB70、MPB83和CE(cfp10-esat6)的多抗反应,说明该融合蛋白具有四个抗原蛋白的免疫学活性.Western blot分析显示:该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生特异性反应,而与牛其它疾病的阳性血清不反应.热稳定性试验证明该融合蛋白属于热稳定性蛋白.结论 融合表达了牛分枝杆菌的四种特异性抗原蛋白,该蛋白具有单个蛋白的免疫原性和稳定性,作为一种新型的诊断抗原具有良好的应用前景.
目的 牛分枝桿菌抗原MPB70、MPB83、CFP-10和ESAT-6的融閤錶達及相關特性分析.方法 應用PCR方法從牛分枝桿菌臨床分離株基因組中擴增穫得mpb70、mpb83、cfp-10和esat-6四箇目的基因片段.採用重疊延伸剪接技術(splicing by overlap extension,SOE)穫得融閤基因cfp10-esat6和mpb83-cfp10-esat6,將mpb70和mpb83-cfp10-esat6串連于載體pUC19-Linker上,再將mpb70-mpb83-cfp10-esat6連于錶達載體pET28a(+)中得到重組質粒pET70-83-C10-E6.轉化BL21(DE3)感受態細胞後,經IPTG誘導穫得以可溶形式錶達的融閤蛋白.用Ni2+親閤層析法純化該融閤蛋白.結果 經ELISA驗證該融閤蛋白能分彆與抗原蛋白MPB70、MPB83和CE(cfp10-esat6)的多抗反應,說明該融閤蛋白具有四箇抗原蛋白的免疫學活性.Western blot分析顯示:該融閤蛋白能與抗牛分枝桿菌暘性血清髮生特異性反應,而與牛其它疾病的暘性血清不反應.熱穩定性試驗證明該融閤蛋白屬于熱穩定性蛋白.結論 融閤錶達瞭牛分枝桿菌的四種特異性抗原蛋白,該蛋白具有單箇蛋白的免疫原性和穩定性,作為一種新型的診斷抗原具有良好的應用前景.
목적 우분지간균항원MPB70、MPB83、CFP-10화ESAT-6적융합표체급상관특성분석.방법 응용PCR방법종우분지간균림상분리주기인조중확증획득mpb70、mpb83、cfp-10화esat-6사개목적기인편단.채용중첩연신전접기술(splicing by overlap extension,SOE)획득융합기인cfp10-esat6화mpb83-cfp10-esat6,장mpb70화mpb83-cfp10-esat6천련우재체pUC19-Linker상,재장mpb70-mpb83-cfp10-esat6련우표체재체pET28a(+)중득도중조질립pET70-83-C10-E6.전화BL21(DE3)감수태세포후,경IPTG유도획득이가용형식표체적융합단백.용Ni2+친합층석법순화해융합단백.결과 경ELISA험증해융합단백능분별여항원단백MPB70、MPB83화CE(cfp10-esat6)적다항반응,설명해융합단백구유사개항원단백적면역학활성.Western blot분석현시:해융합단백능여항우분지간균양성혈청발생특이성반응,이여우기타질병적양성혈청불반응.열은정성시험증명해융합단백속우열은정성단백.결론 융합표체료우분지간균적사충특이성항원단백,해단백구유단개단백적면역원성화은정성,작위일충신형적진단항원구유량호적응용전경.
