免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2008年
1期
79-82
,共4页
田代印%符州%王晓芳%王莉佳
田代印%符州%王曉芳%王莉佳
전대인%부주%왕효방%왕리가
白细胞介素4%受体拮抗体%杆状病毒%真核表达
白細胞介素4%受體拮抗體%桿狀病毒%真覈錶達
백세포개소4%수체길항체%간상병독%진핵표체
目的 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达鼠IL-4受体拮抗体 (mIL-4RA)蛋白.方法 PCR方法扩增小鼠IL-4 C118截断型基因,定向克隆入转移质粒pFastBacHTB中,转化感受态DH10Bac细胞,在DH10Bac细胞内重组pFastBacHTB与杆粒发生转座.筛选阳性克隆,提取重组杆粒,转染sf9昆虫细胞株,获取完整重组杆状病毒.反复感染sf9细胞,扩增病毒同时表达目的 蛋白;用ELISA方法进行蛋白鉴定并初步定量.结果 经核苷酸序列测定及PCR方法,鉴定成功获得含mIL-4RA基因的重组杆粒;通过杆粒转染后sf9细胞所表现出来的细胞病变,推断成功转染并获得重组杆状病毒;最后ELISA方法初步定量sf9细胞培养上清中mIL-4RA蛋白表达量为(1.15±0.12) ng/mL.结论 本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达mIL-4RA蛋白,为进一步研究其生物学活性及功能奠定了实验基础,同时亦为其他蛋白质的真核表达提供了方法学的参考.
目的 利用Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統錶達鼠IL-4受體拮抗體 (mIL-4RA)蛋白.方法 PCR方法擴增小鼠IL-4 C118截斷型基因,定嚮剋隆入轉移質粒pFastBacHTB中,轉化感受態DH10Bac細胞,在DH10Bac細胞內重組pFastBacHTB與桿粒髮生轉座.篩選暘性剋隆,提取重組桿粒,轉染sf9昆蟲細胞株,穫取完整重組桿狀病毒.反複感染sf9細胞,擴增病毒同時錶達目的 蛋白;用ELISA方法進行蛋白鑒定併初步定量.結果 經覈苷痠序列測定及PCR方法,鑒定成功穫得含mIL-4RA基因的重組桿粒;通過桿粒轉染後sf9細胞所錶現齣來的細胞病變,推斷成功轉染併穫得重組桿狀病毒;最後ELISA方法初步定量sf9細胞培養上清中mIL-4RA蛋白錶達量為(1.15±0.12) ng/mL.結論 本研究利用Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統成功錶達mIL-4RA蛋白,為進一步研究其生物學活性及功能奠定瞭實驗基礎,同時亦為其他蛋白質的真覈錶達提供瞭方法學的參攷.
목적 이용Bac-to-Bac간상병독표체계통표체서IL-4수체길항체 (mIL-4RA)단백.방법 PCR방법확증소서IL-4 C118절단형기인,정향극륭입전이질립pFastBacHTB중,전화감수태DH10Bac세포,재DH10Bac세포내중조pFastBacHTB여간립발생전좌.사선양성극륭,제취중조간립,전염sf9곤충세포주,획취완정중조간상병독.반복감염sf9세포,확증병독동시표체목적 단백;용ELISA방법진행단백감정병초보정량.결과 경핵감산서렬측정급PCR방법,감정성공획득함mIL-4RA기인적중조간립;통과간립전염후sf9세포소표현출래적세포병변,추단성공전염병획득중조간상병독;최후ELISA방법초보정량sf9세포배양상청중mIL-4RA단백표체량위(1.15±0.12) ng/mL.결론 본연구이용Bac-to-Bac간상병독표체계통성공표체mIL-4RA단백,위진일보연구기생물학활성급공능전정료실험기출,동시역위기타단백질적진핵표체제공료방법학적삼고.
