北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2008年
2期
151-154
,共4页
娄雅莉%孙樱林%赵铁强%刘国庆%冯海兰
婁雅莉%孫櫻林%趙鐵彊%劉國慶%馮海蘭
루아리%손앵림%조철강%류국경%풍해란
牙釉质蛋白质类%基因表达%细胞系%小鼠
牙釉質蛋白質類%基因錶達%細胞繫%小鼠
아유질단백질류%기인표체%세포계%소서
目的:构建小鼠重组釉蛋白基因的真核表达系统,并建立稳定表达该蛋白的细胞系.方法:取初生小鼠牙胚组织,提取 RNA,用 RT-PCR 技术扩增釉蛋白基因片段,经双酶切后克隆至真核表达载体 pcDNA3.1TM/myc-His(-)B 上, 转化大肠杆菌E.coli DH5α, 中提质粒,将该重组表达质粒转染至 HEK 293A 细胞,用 G418 筛选出阳性克隆,并检测釉蛋白的表达水平.结果:通过测序表明,小鼠釉蛋白基因被成功地连接到了真核表达载体上.将该表达系统转染 HEK 293A 细胞后,进行 Western Blot 检测,证明其中有相对分子质量约 32 000 的釉蛋白表达.结论:成功构建了小鼠重组釉蛋白真核表达载体,建立了稳定细胞系,为获得高纯度的釉蛋白,为进一步研究蛋白质功能奠定了基础.
目的:構建小鼠重組釉蛋白基因的真覈錶達繫統,併建立穩定錶達該蛋白的細胞繫.方法:取初生小鼠牙胚組織,提取 RNA,用 RT-PCR 技術擴增釉蛋白基因片段,經雙酶切後剋隆至真覈錶達載體 pcDNA3.1TM/myc-His(-)B 上, 轉化大腸桿菌E.coli DH5α, 中提質粒,將該重組錶達質粒轉染至 HEK 293A 細胞,用 G418 篩選齣暘性剋隆,併檢測釉蛋白的錶達水平.結果:通過測序錶明,小鼠釉蛋白基因被成功地連接到瞭真覈錶達載體上.將該錶達繫統轉染 HEK 293A 細胞後,進行 Western Blot 檢測,證明其中有相對分子質量約 32 000 的釉蛋白錶達.結論:成功構建瞭小鼠重組釉蛋白真覈錶達載體,建立瞭穩定細胞繫,為穫得高純度的釉蛋白,為進一步研究蛋白質功能奠定瞭基礎.
목적:구건소서중조유단백기인적진핵표체계통,병건립은정표체해단백적세포계.방법:취초생소서아배조직,제취 RNA,용 RT-PCR 기술확증유단백기인편단,경쌍매절후극륭지진핵표체재체 pcDNA3.1TM/myc-His(-)B 상, 전화대장간균E.coli DH5α, 중제질립,장해중조표체질립전염지 HEK 293A 세포,용 G418 사선출양성극륭,병검측유단백적표체수평.결과:통과측서표명,소서유단백기인피성공지련접도료진핵표체재체상.장해표체계통전염 HEK 293A 세포후,진행 Western Blot 검측,증명기중유상대분자질량약 32 000 적유단백표체.결론:성공구건료소서중조유단백진핵표체재체,건립료은정세포계,위획득고순도적유단백,위진일보연구단백질공능전정료기출.
