中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2008年
5期
539-543
,共5页
刘立国%冷文川%郑建华%李锐%胡仲明
劉立國%冷文川%鄭建華%李銳%鬍仲明
류입국%랭문천%정건화%리예%호중명
Gateway技术%结核分枝杆菌H37Rv%高通量%表达%纯化染色体
Gateway技術%結覈分枝桿菌H37Rv%高通量%錶達%純化染色體
Gateway기술%결핵분지간균H37Rv%고통량%표체%순화염색체
以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,采用Gateway重组表达系统,以基因长度200～2 500 bp为标准,选择目的基因(n=384),以ORF的保守序列设计引物并加上正反向AttB,通过PCR扩增获得基因片段检测入门克隆,得到的克隆有效率为374/384.通过两次同源重组,这些基因片段被克隆到表达载体中,克隆效率为350/384.随后将这些重组表达质粒分别在2个表达菌株BL21和BL21-codonplus-RP中进行诱导表达,表达得率为270/384,并时其中64个进行了纯化,16个是可溶性表达.这种大规模高效率地克隆表达技术适合各种生物的开放阅读框的克隆表达,是一种高通量的克隆表达方法.
以結覈分枝桿菌H37Rv基因組為模闆,採用Gateway重組錶達繫統,以基因長度200～2 500 bp為標準,選擇目的基因(n=384),以ORF的保守序列設計引物併加上正反嚮AttB,通過PCR擴增穫得基因片段檢測入門剋隆,得到的剋隆有效率為374/384.通過兩次同源重組,這些基因片段被剋隆到錶達載體中,剋隆效率為350/384.隨後將這些重組錶達質粒分彆在2箇錶達菌株BL21和BL21-codonplus-RP中進行誘導錶達,錶達得率為270/384,併時其中64箇進行瞭純化,16箇是可溶性錶達.這種大規模高效率地剋隆錶達技術適閤各種生物的開放閱讀框的剋隆錶達,是一種高通量的剋隆錶達方法.
이결핵분지간균H37Rv기인조위모판,채용Gateway중조표체계통,이기인장도200～2 500 bp위표준,선택목적기인(n=384),이ORF적보수서렬설계인물병가상정반향AttB,통과PCR확증획득기인편단검측입문극륭,득도적극륭유효솔위374/384.통과량차동원중조,저사기인편단피극륭도표체재체중,극륭효솔위350/384.수후장저사중조표체질립분별재2개표체균주BL21화BL21-codonplus-RP중진행유도표체,표체득솔위270/384,병시기중64개진행료순화,16개시가용성표체.저충대규모고효솔지극륭표체기술괄합각충생물적개방열독광적극륭표체,시일충고통량적극륭표체방법.
