暨南大学学报（自然科学与医学版）
暨南大學學報（自然科學與醫學版）
기남대학학보（자연과학여의학판）
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE & MEDICINE EDITION）
2010年
4期
331-335
,共5页
耿梅%陈清%徐丽慧%张延亭%何贤辉
耿梅%陳清%徐麗慧%張延亭%何賢輝
경매%진청%서려혜%장연정%하현휘
白细胞介素7%原核表达载体%包涵体表达%免疫印迹
白細胞介素7%原覈錶達載體%包涵體錶達%免疫印跡
백세포개소7%원핵표체재체%포함체표체%면역인적
目的:构建重组人白细胞介素7(rhIL-7)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并鉴定.方法:以RT-PCR方法扩增编码IL-7的cDNA片段,插入至pET-3d载体中,构建rhIL-7的原核表达载体,阳性克隆经测序鉴定,转化至大肠杆菌BL21(DE3),优化rhIL-7表达条件,利用免疫印迹鉴定重组蛋白.结果:重组载体经DNA测序显示包含正确的rhIL-7编码序列,重组载体转入大肠杆菌后,经IPTG诱导后外源蛋白表达,相对分子质量为17 400,与IL-7理论分子质量一致;免疫印迹显示,外源蛋白可以被人IL-7特异性抗体识别,表明在原核表达的外源蛋白是rhIL-7.rhIL-7主要表达于包涵体中,包涵体表达优化条件为:温度为37 ℃、IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为4 h.结论:成功的构建了rhIL-7的原核表达载体.
目的:構建重組人白細胞介素7(rhIL-7)的原覈錶達載體,在大腸桿菌中錶達併鑒定.方法:以RT-PCR方法擴增編碼IL-7的cDNA片段,插入至pET-3d載體中,構建rhIL-7的原覈錶達載體,暘性剋隆經測序鑒定,轉化至大腸桿菌BL21(DE3),優化rhIL-7錶達條件,利用免疫印跡鑒定重組蛋白.結果:重組載體經DNA測序顯示包含正確的rhIL-7編碼序列,重組載體轉入大腸桿菌後,經IPTG誘導後外源蛋白錶達,相對分子質量為17 400,與IL-7理論分子質量一緻;免疫印跡顯示,外源蛋白可以被人IL-7特異性抗體識彆,錶明在原覈錶達的外源蛋白是rhIL-7.rhIL-7主要錶達于包涵體中,包涵體錶達優化條件為:溫度為37 ℃、IPTG濃度為0.4 mmol/L、誘導時間為4 h.結論:成功的構建瞭rhIL-7的原覈錶達載體.
목적:구건중조인백세포개소7(rhIL-7)적원핵표체재체,재대장간균중표체병감정.방법:이RT-PCR방법확증편마IL-7적cDNA편단,삽입지pET-3d재체중,구건rhIL-7적원핵표체재체,양성극륭경측서감정,전화지대장간균BL21(DE3),우화rhIL-7표체조건,이용면역인적감정중조단백.결과:중조재체경DNA측서현시포함정학적rhIL-7편마서렬,중조재체전입대장간균후,경IPTG유도후외원단백표체,상대분자질량위17 400,여IL-7이론분자질량일치;면역인적현시,외원단백가이피인IL-7특이성항체식별,표명재원핵표체적외원단백시rhIL-7.rhIL-7주요표체우포함체중,포함체표체우화조건위:온도위37 ℃、IPTG농도위0.4 mmol/L、유도시간위4 h.결론:성공적구건료rhIL-7적원핵표체재체.
